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細胞培養(yǎng)的污染及控制
點擊次數：1019 發(fā)布時間：2014-11-10
污染的類型
細胞培養(yǎng)過程中的污染不僅僅指微生物,，而且還包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的,、對細胞生存有害或造成細胞不純的物質，包括生物和化學物質,。
一,、細菌污染
細菌污染是實驗室細胞培養(yǎng)中常見的污染，即使在細胞培養(yǎng)液中加入了抗菌素(一般為預防劑量),，也可能因為操作不慎而引起污染,。zui常見的有革蘭氏陽性菌，如枯草桿菌以及大腸桿菌,、假單胞菌等革蘭氏陰性菌,，其中又以白色葡萄球菌較常見。
培養(yǎng)細胞受細菌污染后,，會出現培養(yǎng)液變混濁,，pH改變。也有的培養(yǎng)液肉眼觀察無多少改變，只能在鏡下發(fā)現菌體才知污染,。所以,，每天應仔細觀察。污染后細胞發(fā)生病理改變,，胞內顆粒增多,、增粗，zui后變圓脫落死亡,，造成試驗失敗和細胞株(系)丟失,。
二、真菌污染
真菌污染是細胞培養(yǎng)過程中zui常見的一種,，尤其在霉雨季節(jié)進行細胞培養(yǎng)更易污染,。zui常見的真菌有煙曲霉、黑曲菌,、孔子霉,、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌,。
培養(yǎng)細胞受真菌污染后,，可見培養(yǎng)液中漂浮著白色或淺黃色的小點，有的散在生長,，培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁,；倒置顯微鏡下可見絲狀、管狀或樹枝狀的菌絲縱橫交錯在細胞之間或培養(yǎng)基中,，有的呈鏈狀排列,。念珠菌和酵母菌呈卵圓形散在細胞周邊和細胞之間。個體細小,，有增多趨勢,。鏡下看時，要將培養(yǎng)瓶用酒精棉球擦干凈,，以防止與瓶外尤其瓶底外面生長的菌絲相混淆,。真菌污染后，細胞生長變慢,，但zui后由于營養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡,。
三、支原體污染
支原體是介于細菌與病毒之間能獨立生活的zui小微生物,，zui小直徑0.2μm,，一般過濾除菌無法去除它，光鏡下難以看清它的形態(tài)結構,。開始不易發(fā)現,，能在偏堿條件(pH7.6～8.0)下生存，對青霉素有抗藥性。多吸附于細胞表面或散在于細胞之間,。電鏡下可見其有三層結構,，無細胞壁，中央有電子密度大的密集顆?；蚪z狀的中心囊,。
培養(yǎng)細胞受支原體污染后，部分敏感細胞可見細胞生長增殖變慢,，部分細胞變圓，從瓶壁脫落,。但多數細胞污染后無明顯變化,，或略有變化，若不及時處理,，還會產生交叉污染,。
四、病毒污染
采用組織細胞培養(yǎng)法生產疫苗,，如果沒有除去潛在病毒的組織培養(yǎng)物,，會產生病毒污染。目前,，從原代猴腎細胞的培養(yǎng)中已發(fā)現不少于20種血清性病毒,。盡管病毒污染的細胞不影響原代培養(yǎng)，但生產疫苗是不安全的,。若二倍體細胞系有SV40或多發(fā)瘤病毒,，B淋巴細胞含EB病毒，細胞和會發(fā)生變異,、轉化,，形成異倍體的細胞系。因此,，潛在病毒是細胞大量生產和疫苗,、干擾素等生物制品制作中的難題。