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染色體制片程序
點(diǎn)擊次數(shù)：898 發(fā)布時(shí)間：2014-11-7
1、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞一個(gè)T75或T25瓶,。
2,、將培養(yǎng)基換成10ml DMEM(H)+10%FBS+0.1ug/ml秋水仙素的培養(yǎng)基，處理1~2小時(shí),。
3,、將細(xì)胞培養(yǎng)液倒掉，馬上加入3~4ml 0.1%胰蛋白酶,，并立即搖晃0.5~1min,。當(dāng)在顯微鏡下看到分裂相細(xì)胞脫壁后，馬上加入終止液終止消化,，并將分裂相細(xì)胞收集在一個(gè)15ml的離心管中,，并在1200r/min離心4min。
4,、將上清液倒掉,，剩余50ul左右的液在管中，并輕微震動(dòng),，使細(xì)胞沉淀重新懸浮,。
5、加入10ml的低滲液（0.075M KCL）,，*毫升要逐滴加入,，并邊加邊搖晃。
6,、37℃水浴中低滲30min,。
7、再加入1ml冰冷的固定液（甲醇：乙酸=3：1 的混合液）,，并馬上搖勻,，離心,，1000r/min、10min,。
8,、同步驟4。
9,、加入10ml冰冷的固定液,，*毫升要逐滴加入，邊加邊搖晃,。
10,、室溫下固定30min，然后離心,，1000r/min,、10min。
11,、同步驟4,。
12、加入10ml冰冷的固定液,，*毫升要逐滴加入,，邊加邊搖晃。
13,、室溫下固定15min,，然后離心，1000r/min,、10min,。
14、重復(fù)步驟11~13一次,。
15,、將離心后的上清液倒掉，并加入50~100ul的新鮮固定液重懸細(xì)胞,。
16、滴片（玻片要求是濕冷的干凈的,，滴片高度要大于30cm,。玻片傾斜角度15~30度左右）
17、鏡檢,。