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基底動脈平滑肌細(xì)胞原代培養(yǎng)
點擊次數(shù)：1527 發(fā)布時間：2014-11-3
培養(yǎng)液：MEM(GIBCO),，20％FBS，雙抗100IU／ml,；
原代細(xì)胞培養(yǎng)：取5kg左右兔空氣栓塞法處死后斷頭,，于無菌條件下從枕大孔處用大止血箝扳開顱骨暴露并小心取出腦組織放入裝有DMEM的培養(yǎng)皿中，用眼科鑷分離基底動脈后按常規(guī)平滑肌方法貼塊培養(yǎng),。
傳代：
（1）吸除培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,。
（2）D-Hanks液沖洗2遍。
（3）加入消化液少許,，以能覆蓋瓶底為限,。
（4）倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大時,，立即終止消化,。
（5）吸除消化液，向瓶底注入D-Hanks液數(shù)毫升,，輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶,，把殘留消化液沖掉。
（6）用吸管吸取培養(yǎng)液輕輕反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞,，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液,；傳代將原代細(xì)胞按1：1傳代，此后按1：3進行傳代,。
（7）傳代后細(xì)胞放置在37℃,，5%CO2孵育箱內(nèi)培養(yǎng)。
我在做細(xì)胞培養(yǎng)時的一些小經(jīng)驗：
（1）在超凈臺操作（廢液杠放入）前要用紫外燈照30MIN以上,，75%酒精擦手
（2）貼塊法要細(xì)胞貼壁好一定剪的夠碎（先把血管剪成小段再狂剪一頓）,，鋪開時要平均的展開，聚在一起翻面時容易沖掉,。
（3）做原代的時候從取材直到放進孵箱都要嚴(yán)格無菌操作,，該換的管子還是換了，別省了根管子壞了一瓶細(xì)胞
（4）原代培養(yǎng)FBS含量高些,，原代很嬌貴的