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細(xì)胞培養(yǎng)FAQ
點(diǎn)擊次數(shù)：1344 發(fā)布時(shí)間：2014-10-24
1,、冷凍管應(yīng)如何解凍？
取出冷凍管后,， 須立即放入37 °C 水槽中快速解凍,， 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,， 否則易發(fā)生污染情形,。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)， 必須注意安全,， 預(yù)防冷凍管之爆裂,。
2、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí),， 是否應(yīng)馬上去除DMSO,？
除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細(xì)胞外， 絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞）， 在解凍之后,， 應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中,， 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附之問題,。
3,、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？
不能,。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,， 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基， 細(xì)胞大都無法立即適應(yīng),， 造成細(xì)胞無法存活,。
4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類,？
不能,。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源， 所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響,。來自不同物種的血清,， 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細(xì)胞無法存活,。
5,、何謂FBS, FCS, CS, HS ?
FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 兩者都是指胎牛血清,， FCS 乃錯誤的使用字眼,， 請不要再使用。CS (calf serum) 則是指小牛血清,。HS (horseserum) 則是指馬血清,。
6、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5 % 或10% CO2,？或根本沒有影響,？
一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng)， 而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2 濃度,。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時(shí),，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10 % CO2；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時(shí),， 則應(yīng)使用5 % CO2 培養(yǎng)細(xì)胞,。
7、何時(shí)須更換培養(yǎng)基,？
視細(xì)胞生長密度而定,， 或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間,，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。
8,、培養(yǎng)基中是否須添加抗生素,？
除于特殊篩選系統(tǒng)中外， 一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下,， 培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素,。
9、附著性細(xì)胞繼代時(shí)所使用之trypsin-EDTA 濃度,？應(yīng)如何處理,？
一般使用之trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。*次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中,， 保存于–20 °C,，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin 之活性降低， 并可減少污染之機(jī)會,。
10,、懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理？
一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,， 稀釋細(xì)胞濃度即可,， 若培養(yǎng)液太多時(shí)， 可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高,， 直到無法容納為止,。分瓶時(shí)取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶， 加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度,， 重復(fù)前述步驟即可,。
11、欲將一般動物細(xì)胞離心下來,，其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速？
欲回收動物細(xì)胞,，其離心速率一般為300xg (約1,000rpm),，5 - 10 分鐘， 過高之轉(zhuǎn)速,， 將造成細(xì)胞死亡,。
12、細(xì)胞之接種密度為何,？
依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可,。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無法生長之一重要原因。
13,、細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何,？
動物細(xì)胞冷凍保存時(shí)zui常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原來細(xì)胞生長用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之,。注意：由于DMSO 稀釋時(shí)會放出大量熱能， 故不可將DMSO 直接加入細(xì)胞液中,， 必須使用前先行配制完成,。