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成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)和形態(tài)
點擊次數(shù)：1012 發(fā)布時間：2014-10-8
成纖維細(xì)胞培養(yǎng)
（一） 原代培養(yǎng)
1,、在手術(shù)室無菌條件下，切取新鮮的皮膚,，增殖性瘢痕和瘢痕疙瘩組織,，修除表皮和皮下組織，鹽水反復(fù)沖洗后放入含PS的DMEM培養(yǎng)液內(nèi)帶回?zé)o菌工作間,。
2,、把組織塊置于培養(yǎng)皿內(nèi)，Hank,s液漂洗三遍后吸凈Hank,s液,，眼科剪反復(fù)剪切組織塊成0.5－1mm3大小,。用彎頭吸管吸取組織塊接種于40ml培養(yǎng)方瓶瓶壁上，組織塊間留約0.3－0.5cm的間距,。
3,、 塞好瓶塞，放入37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)3.5小時使培養(yǎng)的組織小塊微干涸。
4,、從溫箱中取出培養(yǎng)瓶,，向瓶底輕輕注入含20%CS及PS的DMEM培養(yǎng)液5ml，然后緩緩翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,，讓培養(yǎng)液慢慢覆蓋附于瓶壁上的組織小塊,，置于37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
5,、一周后取出培養(yǎng)瓶,，棄去瓶內(nèi)培養(yǎng)液，Hank,s液漂洗兩次后加相同的培養(yǎng)液5ml繼續(xù)培養(yǎng),。以后待細(xì)胞萌出后,，同樣方法每周換液兩次。
（二）傳代培養(yǎng)
待原代培養(yǎng)細(xì)胞生長基本融合成片時即可傳代,。
1,、吸出培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液，Hank,s液漂洗兩次,，向瓶內(nèi)加入0.5%的胰蛋白酶溶液少許以覆蓋瓶底為度,。
2、大約1分鐘左右,，鏡下觀察細(xì)胞胞質(zhì)回縮,，細(xì)胞間隙增大時立即吸出胰蛋白酶液，加入DMEM培養(yǎng)液終止消化,。
3,、用吸管吸取培養(yǎng)液輕輕反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞使之脫落形成細(xì)胞懸液，按1：3比例分裝傳代,，加入足量的DMEM培養(yǎng)液后置于37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),。
4、每周換液兩次,，待細(xì)胞融合成單層再次傳代,。本實驗均在第4－8代進(jìn)行。