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無(wú)血清技術(shù)及其培養(yǎng)基
點(diǎn)擊次數(shù)：919 發(fā)布時(shí)間：2014-9-23
經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基后,，無(wú)血清培養(yǎng)基和無(wú)血清培養(yǎng)成為當(dāng)今細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢(shì),。采用無(wú)血清培養(yǎng)可降低生產(chǎn)成本，簡(jiǎn)化分離純化步驟,，避免病毒污染造成的危害,。
無(wú)血清培養(yǎng)基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外較長(zhǎng)時(shí)間生長(zhǎng)繁殖的合成培養(yǎng)基。但是它們可能包含個(gè)別蛋白或大量蛋白組分,。雖然基礎(chǔ)培養(yǎng)基加少量血清所配制的*培養(yǎng)基可以滿足大部分細(xì)胞培養(yǎng)的要求,，但對(duì)有些實(shí)驗(yàn)卻不適合，如觀察一種生長(zhǎng)因子對(duì)某種細(xì)胞的作用,，這時(shí)需要排除其他生長(zhǎng)因子的干擾作用,。而血清中可能含有各種生長(zhǎng)因子；又如需要測(cè)定某種細(xì)胞在培養(yǎng)過程中分泌某種物質(zhì)（抗體,、生長(zhǎng)因子）的能力,；或者要大規(guī)模的培養(yǎng)某種細(xì)胞，以獲得它們的分泌產(chǎn)物,。因此研制出無(wú)血清培養(yǎng)基一直是生物科學(xué)工作者努力的目標(biāo),。上海恒利安生物科技有限公司已成功開發(fā)了商業(yè)化的多種無(wú)血清培養(yǎng)基，可滿足眾多廠商的需求,。
一,、無(wú)血清培養(yǎng)基的基本配方:基本成分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。
用于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),，多數(shù)呈貼壁生長(zhǎng)或兼性貼壁生長(zhǎng),；而當(dāng)其在無(wú)血清、無(wú)蛋白培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí),，由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白,、層粘連蛋白、膠原,、玻表粘連蛋白,，細(xì)胞往往以懸浮形式生長(zhǎng)。
添加組分包括以下幾大類物質(zhì)：
（1）促貼壁物質(zhì)：許多細(xì)胞必須貼壁才能生長(zhǎng),，這種情況下無(wú)血清培養(yǎng)基中一定要添加促貼壁和擴(kuò)展因子，一般為細(xì)胞外基質(zhì),，如纖連蛋白,、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子,，對(duì)許多細(xì)胞的繁殖和分化,，起著重要作用。纖連蛋白主要促進(jìn)來自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化，這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞,、肉瘤細(xì)胞,、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞,、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞,、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞等,。
（2）促生長(zhǎng)因子及激素：針對(duì)不同細(xì)胞添加不同的生長(zhǎng)因子,。激素也是刺激細(xì)胞生長(zhǎng)、維持細(xì)胞功能的重要物質(zhì),，有些激素是許多細(xì)胞*的,，如胰島素。
（3）酶抑制劑：培養(yǎng)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,，需要用胰酶消化傳代,，在無(wú)血清培養(yǎng)基中*須含酶抑制劑，以終止酶的消化作用,，達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的,。zui常用的是大豆胰酶；抑制劑,。
（4）結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白：常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白,。牛血清白蛋白的添加比較大，可增加培養(yǎng)基的粘度,，保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷,。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無(wú)血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。
（5）微量元素：硒是zui常見的,。