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實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)
點(diǎn)擊次數(shù)：976 發(fā)布時間：2014-9-15
1. 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,，無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌，以70 %ethanol 擦拭無菌操作抬面,，并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后,，才開始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株,，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后,，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺,，以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘以上后,，再進(jìn)行下一個細(xì)胞株之操作,。
2. 無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品,，例如試管架,、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通,。實(shí)驗(yàn)用品以70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi),。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無菌區(qū)域，勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作,。
3. 小心取用無菌之實(shí)驗(yàn)物品,，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,，亦不要在打開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn),。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身,，傾斜約45° 角取用,，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
4. 工作人員應(yīng)注意自身之安全,，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。對于來自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壷疅o菌操作臺(至少Class II),。操作過程中,，應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生，小心毒性藥品,，例如DMSO 及TPA 等,，并避免尖銳針頭之傷害等。
5. 定期檢測下列項(xiàng)目：
5.1. CO2 鋼瓶之CO2 壓力
5.2. CO2 培養(yǎng)箱之CO2 濃度,、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,，每周更換),。
5.3. 無菌操作臺內(nèi)之a(chǎn)irflow 壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜,，預(yù)濾網(wǎng)(300小時/預(yù)濾網(wǎng),，3000 小時/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),，定期更換水槽的水
請問工作濃度的胰酶是不是應(yīng)保存在－20度,？如果放在4度冰箱可以保存多久呢？是不是幾個小時就會失去活性,？
平時放在-20度,，分裝在50毫升螺口管，用時拿一管放4度用,。
1. 認(rèn)真按照操作規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn),，一般不大會導(dǎo)致污染，很多情況下是由于所用的試劑或培養(yǎng)基有污染而使實(shí)驗(yàn)失敗，
2. 粉末培養(yǎng)基配制好后(加了血清),，一般在4度盡量不要超過1個月,，如在-20度存放時間可長一些，但也不要超過3-4個月,，可能對于永生化細(xì)胞株來說要求不是太高,，但我在過去的4年里一直是作原代細(xì)胞培養(yǎng)的，細(xì)胞嬌弱,，經(jīng)驗(yàn)表明放置時間不宜過長,。
3. 關(guān)于實(shí)驗(yàn)用品的清洗與消毒，我的經(jīng)驗(yàn)是：用過的玻璃器皿先在清水中浸泡30min以上,，然后加少許清洗劑,，以超聲波洗滌30min左右，(如無超聲波洗滌器可用軟毛刷輕輕刷洗干凈),，撈出晾干,，再在鉻酸洗液中浸泡6-18h(或)后，自來水清洗10-15遍,，雙蒸水清洗3-4遍,，晾干，高壓消毒后即可使用,。
許多塑料制品也可以高壓消毒,，例如培養(yǎng)瓶蓋，膠塞,，吸頭等,。不能用于高壓的一般均已制成一次性作用的商品了，當(dāng)然如果money有限,，如進(jìn)口的培養(yǎng)板,、皿等，也可以重復(fù)使用1-2次,，我當(dāng)時使用方法是將其*清潔后,，使用前在紫外燈下敞開照射1-1.5h即可，我做過多次,，沒有出現(xiàn)問題,。塑料培養(yǎng)瓶由于清洗消毒不便，不要重復(fù)使用,，如一定要重復(fù)用,，可用環(huán)氧乙烷等消毒，(消毒后一定要放置半年以上方可使用)
在光鏡下,，上皮細(xì)胞通常呈“鋪路石”樣排布,，細(xì)胞之間有拉絲現(xiàn)象（即距離較遠(yuǎn)的細(xì)胞可以通過細(xì)長的觸手相連）,，細(xì)胞有成片生長的特性。而間質(zhì)細(xì)胞通常呈梭形,，沒有有成片生長的特性,，細(xì)胞之間的不緊密。但是細(xì)胞的形態(tài)特征會因?yàn)樯L條件的改變而改變,，如HeLa細(xì)胞是上皮細(xì)胞,，但是在酸性培養(yǎng)條件下會變?yōu)樗笮巍?/p>