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技術(shù)文章
如何進(jìn)行BrdU標(biāo)記法
點(diǎn)擊次數(shù)：970 發(fā)布時(shí)間：2014-9-9
1．細(xì)胞以1.5×105/ml細(xì)胞數(shù)接種于直徑35ml培養(yǎng)皿中（內(nèi)放置一蓋玻片），培養(yǎng)1天,，用含0.4％ FCS培養(yǎng)液同步化3天,，使絕大多數(shù)細(xì)胞處于G0期。
2．終止細(xì)胞培養(yǎng)前,，加入BrdU（終濃度為30μg/L）,，37℃，孵育40min,。
3．棄培養(yǎng)液,，玻片用PBS洗滌3次。
4．甲醇/醋酸固定10min,。
5．經(jīng)固定的玻片空氣干燥,，0.3％H2O2-甲醇30min滅活內(nèi)源性氧化酶。
6．5％正常兔血清封閉。
7．甲酰胺100℃,，5min變性核酸。
8．冰浴冷卻后PBS洗滌,，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃度1：50）,，陰性對(duì)照加PBS或血清。
9．按ABC法進(jìn)行檢測(cè),，蘇木素或伊紅襯染,，在顯微鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)高倍視野中細(xì)胞總數(shù)及BrdU陽性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算標(biāo)記指數(shù)（LI）,。