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傳代培養(yǎng)細胞染色體顯示法
點擊次數(shù)：913 發(fā)布時間：2014-9-1
1．培養(yǎng)細胞：取處于指數(shù)生長期,、用較大瓶皿培養(yǎng)的、80％～90％匯合單層培養(yǎng)細胞,。
2．加秋水仙素：使用zui終濃度為0.02～0.8微克/毫升營養(yǎng)液,，溫箱繼續(xù)培養(yǎng)6～10小時；或用低溫封閉法：把培養(yǎng)細胞置于4℃條件下6～12小時后，再于37℃溫箱繼續(xù)培養(yǎng)6～10小時處理（加秋水仙素）,。
3．采集分裂細胞：可利用分裂中期細胞體變圓與底物附著不牢特點,，此時手持培養(yǎng)瓶，左右反復橫向水平搖動,，令培養(yǎng)液在培養(yǎng)細胞表面反復沖刷,。應用此法可使90％的中期分裂細胞從瓶壁脫落，注意勿用力過猛,，以防多量非分裂細胞脫落影響觀察,。
4．離心：收集培養(yǎng)液，1000轉/分鐘離心5～10分鐘,。
5．低滲處理：吸除上清液,、加入預溫至37℃的0.075M KCl溶液，在溫箱中靜置20～30分鐘,。
6．預固定：向懸液中加新鮮1：3醋酸,、甲醇固定液1ml，用吸管吹打調勻,，此措施能起到先使細胞表面輕微固定，可防止固定后細胞粘連成塊,。
7．固定：離心,，同4，吸除上清液,，加新鮮固定劑5～10ml,；加固定劑時要用一手微斜持離心管，另手用吸管吸取固定劑,，把固定劑逐滴滴在離心管壁上,，使之慢慢流入離心管中，然后輕輕吹打均勻,，置15～20分鐘,。
8．重復7，末次離心后,，小心吸除大部分上清,，據(jù)懸液中細胞密度大小，余下固定液0.5～1ml,。
9．制片：用滴片法制片,，按如下步驟：*洗凈載物片，勿留任何油脂,，置冰箱中儲備備用,。滴片前現(xiàn)從冰箱中取出冷載物片1片，在載物片表面出現(xiàn)細微水氣時，立即向片的一側滴2～3滴細胞懸液,，滴片時的距離能保持半米高度才好,。滴片后置室溫中令其自然干燥，或用吹風機熱風吹干亦可,。如此制備好的標本可置盒中備用或立即進行染色觀察,。
10． 染色和封片：一般常用Giemsa染色：取干液Giemsa 1份加pH6.8磷酸緩沖液9份混合，染色10分鐘后,，水洗,、晾干、可直接觀察,。如標本需要保存或做長時間觀察,，可過二甲苯兩次后，用中性樹膠封片后,，再過二甲苯,，然后封片亦可。