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如何進行細胞電融合實驗
點擊次數(shù)：872 發(fā)布時間：2014-8-14
目的要求
使學生在了解電融合原理的基礎(chǔ)上，學會掌握各種細胞懸液的制備及電融合過程的操作方法,。
實驗原理
游離的動物細胞或原生質(zhì)體,，置于電融合室中,，在高頻交流電場的作用下，細胞被極化,，成為偶極子,，造成細胞之間相互連接,，如果施加的高頻交流電壓（既正弦波的P-P值）過高或作用時間過長，則細胞連接成串珠狀，應適當控制以上條件,，盡量是兩細胞處于點接觸狀態(tài),；然后施加方波脈沖予以刺激，由于電脈沖的瞬間作用,，可擊破兩細胞接觸點部位的質(zhì)膜，此時質(zhì)膜脂類分子發(fā)生重組,，同時由于細胞表面的張力作用,，使兩細胞融合逐步完成,。
實驗用品
器材：JCF-1型細胞電融合儀、細胞融合池,、普通離心機,、倒置顯微鏡（或研究用顯微鏡）刻度離心管、刻度吸管,、小燒杯（10ml）等,。
試劑：甘露醇、蔗糖,、氯化鈉等。
材料：雞血,。
實驗方法
一,、動物細胞的制備
用滅菌的注射器先吸入Alsver液(葡萄糖2.05g,，枸櫞酸鈉0.8g,，NaCl 0.42g,，加重蒸水100ml) 1ml，再從雞的翼下靜脈取血0.5～1ml,，取出后放入刻度離心管中,，再加入2~3ml Alsver液,，使總量為4~5ml，混勻并封口,，置于4℃冰箱內(nèi)可供一周內(nèi)使用,。
二、細胞電融合
(1) 連接電源線插頭至電源線插座,。
(2) 插入融合小室電極至電源線插座,，將含有一定密度的動物細胞融合液加入融合小室內(nèi)，將融合小室板放置倒置顯微鏡下,，調(diào)正光距至細胞清晰,。
(3) 按下電源開關(guān)。
(4) 用粗,、中,、細調(diào)調(diào)節(jié)成串脈沖所需頻率300~400KHz，然后調(diào)節(jié)所需成串脈沖電壓30~40V,。
(5) 調(diào)節(jié)融合脈沖脈寬,，調(diào)節(jié)融合脈沖所需個數(shù)，選擇好閘門時間(一般為“中”)
(6) 調(diào)節(jié)融合脈沖電壓至120~300V,。
(7) 同時按下成串脈沖及融合脈沖開關(guān),，此時在倒置顯微鏡中可觀察到細胞移動并排列成串狀。
按下脈沖觸發(fā)開關(guān),，可觀察到細胞被電脈沖擊穿,，并與相鄰的細胞發(fā)生融合。此時實驗完成,。取下融合小室,，關(guān)閉電源。