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士鋒生物染色體分帶技術(shù)
點(diǎn)擊次數(shù)：861 發(fā)布時(shí)間：2014-8-7
染色體顯帶技術(shù)是在顯示染色體基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的技術(shù)，其優(yōu)點(diǎn)是能顯現(xiàn)染色體本身更細(xì)微的結(jié)構(gòu),，有助于更準(zhǔn)確地識(shí)別每條染色體及染色體異常疾病,。染色體分帶技術(shù)能適用于各種細(xì)胞染色體標(biāo)本。
染色體顯帶是沿著整條染色體的長(zhǎng)軸,，能顯現(xiàn)出著色深淺不同,、橫向走的帶型。目前認(rèn)為染色體顯帶現(xiàn)象是染色體結(jié)構(gòu)所致,。但用特殊方法處理后,，再用染料染色，則帶型更加清晰,，隨顯帶方法不同,，顯現(xiàn)出的帶型的特點(diǎn)也不一樣，這說(shuō)明帶的出現(xiàn)與染料的特異結(jié)合相關(guān),。人類染色體能顯現(xiàn)出近2000個(gè)G帶,，這些帶再融合成一般顯微鏡下可見(jiàn)的850條左右的高分辯染色體帶型或350條帶左右的常規(guī)帶型。
常見(jiàn)的幾咱顯帶方法：
（一）,、G帶
也稱為G顯帶,，是zui常用的顯帶方法，具有操作簡(jiǎn)便,、經(jīng)濟(jì)及標(biāo)本能長(zhǎng)期保存等優(yōu)點(diǎn),。
1、Giemsa原液的配制：
（1）稱3.75gGiemsa粉置研磨器中,，加少許丙三醇研磨,，研磨越細(xì)越好；
（2）將研細(xì)的Giemsa加丙三醇移入500ml棕色瓶?jī)?nèi),，丙三醇的總量為250ml,，用一定量甲醇洗干凈研磨器。
（3）搖勻,，置60℃水浴鍋24小時(shí)或37℃溫箱72小時(shí),，經(jīng)常搖動(dòng),。
（4）取出冷卻后，加甲醇總量至250ml混勻,，密封棕色瓶備用,。貯藏時(shí)間越長(zhǎng)，染色效果越好,。
2,、實(shí)驗(yàn)材料：
中期染色體標(biāo)本；
0.9%氯化鈉注射水,；
3%tris液體,；
0.25%胰蛋白酶；
Gremsa染色液,；
蒸餾水,；
水浴鍋；
立式染缸,；
定時(shí)器或時(shí)針,；
溫度計(jì)；
鑷子及紗布,；
刻字筆,；
3、操作程序：
（1）消化液配制：取0.9%氯化鈉注射水100ml,，加0.25%胰蛋白酶1ml,，制成0.025%胰蛋白酶鹽水消化液，加4-5滴tris液調(diào)PH6.8左右,，移消化液于立式染色缸并置37℃水浴鍋中備用,；
（2）染液配制：取立式染缸，加蒸餾水500ml,，加3滴tris液調(diào)PH并加入Giemea染液1ml左右,，用吸管調(diào)勻備用；
（3）漂洗液：取立式染缸一個(gè),，內(nèi)加蒸餾水備用,；
（4）試消化：待消化液溫度在37℃左右時(shí)，取同批標(biāo)本較多者標(biāo)本1張,，分二節(jié)或三節(jié)進(jìn)行消化,，每節(jié)相差十五秒左右，從45秒或60秒開(kāi)始增減,。取出后先在紗布或吸水紙上直立除去帶出胰蛋白酶,，后置蒸餾水染缸內(nèi)漂洗，取出后，標(biāo)本斜面朝上,，刮去染色缸內(nèi)染液上浮膜，沿槽插入,，每分鐘移動(dòng)1次,，染色3-5分鐘。