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士鋒生物液相色譜常見14個問題及其解決方法
點擊次數(shù)：880 發(fā)布時間：2014-7-14
一、問：用hplc進(jìn)行分析時,，保留時間有時發(fā)生漂移,，有時發(fā)生快速變化，原因何在?如何解決?
關(guān)于漂移問題：
1. 溫度控制不好,，解決方法是采用恒溫裝置,，保持柱溫恒定。
2. 流動相發(fā)生變化,，解決辦法是防止流動相發(fā)生蒸發(fā),、反應(yīng)等。
3. 柱子未平衡好,，需對柱子進(jìn)行更長時間的平衡,。
關(guān)于快速變化問題：
1. 流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速,，使之保持穩(wěn)定,。
2. 泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出,。
3. 流動相不合適,，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合。
二,、問：色質(zhì)聯(lián)用中毛細(xì)柱的選擇應(yīng)注意什么問題?
1. 柱效要高
2. 熱穩(wěn)定性好
3. 化學(xué)惰性強(qiáng)
具體選擇應(yīng)注意：
1. 柱極性,。根據(jù)分析樣品選擇不同極性的柱子進(jìn)行分析。
2. 柱子內(nèi)徑,。內(nèi)徑大小決定柱容量,。
3. 液膜厚度。分析樣品溫度不一樣,，對膜厚有不同要求,，溫度高液膜要厚，溫度低液膜要薄,。
4. 柱長度,。柱越長，柱效越高,，分離效果越好,，但也存在吸附問題，柱子過長，分析時間長,，因此要根據(jù)樣品考慮柱子長度,。
5. 外涂層(柱體)的選擇。
6. 另外還有儀器型號,、分析對象等因素,。
三、問：液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?
1. 篩板堵塞或柱失效,，解決辦法是反向沖洗柱子,，替換篩板或更換柱子。
2. 存在干擾峰,，解決辦法為使用較長的柱子,，改換流動相或更換選擇性好的柱子。
四,、問：從那些方面可以簡單判別毛細(xì)管柱子的熱穩(wěn)定性好壞?
1. 分配容量(或容量因子)K,，好的柱子在高溫運行后，分配容量K不應(yīng)有明顯的下降,，否則,，說明柱子的熱穩(wěn)定性不好。
2. 理論塔板數(shù)n,，熱穩(wěn)定性好的柱子經(jīng)受高溫后,，理論塔板數(shù)應(yīng)基本保持恒定。
3. 柱子的極性,。熱穩(wěn)定性好的柱子,，高溫前后極性變化不大，具體表現(xiàn)為保留指數(shù)I值沒有大的變化,。
4. 噪聲,。熱穩(wěn)定性好的柱子在高溫下使用后，噪聲不能增加,。
5. 柱子的去活層,，毛細(xì)管柱子涂固定液前內(nèi)部一般要用去活性試劑去活以增加惰性。質(zhì)量好的毛細(xì)管柱子高溫后,，去活層不應(yīng)該變化,，表現(xiàn)在對強(qiáng)極性樣品或酸堿性樣品的吸附性不能增加。
五,、問：為什么進(jìn)樣器內(nèi)的玻璃襯套會對色譜行為造成影響?
進(jìn)樣器內(nèi)的玻璃襯套主要有下列作用：
1. 提供一個溫度均勻的汽化室，防止局部過熱,。
2. 玻璃的惰性較不銹鋼好,，減少了在汽化期間樣品分解的可能性。
3. 易于拆換清洗，以保持清潔的汽化室表面,，一些痕量非揮發(fā)性組分會逐漸積累殘存于汽化室,，高溫下會慢慢分解，使基流增加,，噪聲增大,，通過清洗玻璃襯套可以消除這種影響。
4. 可根據(jù)需要選擇管壁厚度及內(nèi)徑適宜的玻璃襯套,，以改變汽化室的體積,，而不用更換整個進(jìn)樣加熱塊。
從以上幾個方面可以知道玻璃襯套對色譜行為造成影響的原因,。
六,、問：毛細(xì)管色譜分流進(jìn)樣時，非線性分流的主要原因是什么?
1. 進(jìn)樣器溫度太低,，樣品汽化不*,，發(fā)生分級分流。
2. 進(jìn)樣器溫度太高,，某些組分可能發(fā)生熱分解,，也有的樣品可能發(fā)生催化分解，或樣品部分地被吸附在進(jìn)樣器內(nèi)表面上,。
3. 在分流點以前樣品沒有混合均勻或混合不充分,。
4. 系統(tǒng)的進(jìn)樣墊、柱接頭等地方漏氣,。
七,、問：HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法。
1. 樣品量不足,，解決辦法為增加樣品量,。
2. 樣品未從柱子中流出?？筛鶕?jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動相或柱子,。
3. 樣品與檢測器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器,。
4. 檢測器衰減太多,。調(diào)整衰減即可。
5. 檢測器時間常數(shù)太大,。解決辦法為降低時間參數(shù),。
6. 檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗,。
7. 檢測池中有氣泡,。解決辦法為排氣,。
8. 記錄儀測壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可,。
9. 流動相流量不合適,。調(diào)整流速即可。
10. 檢測器與記錄儀超出校正曲線,。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器,，重作校正曲線。
八,、問：做HPLC分析時,，柱壓不穩(wěn)定，原因何在?如何解決?
原因可能有：
1. 泵內(nèi)有空氣,，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣,，對溶劑進(jìn)行脫氣處理。
2. 比例閥失效,，更換比例閥即可,。
3. 泵密封墊損壞，更換密封墊即可,。
4. 溶劑中的氣泡,，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法,。
5. 系統(tǒng)檢漏,，找出漏點，密封即可,。
6. 梯度洗脫,，這時壓力波動是正常的。
九,、問：做PGS/MS分析時,，如何防止焦油狀污染物進(jìn)入毛細(xì)柱?
聚合物，尤其是一些含氮,，硫及鹵素的高分子裂解時,，常有焦油狀物質(zhì)產(chǎn)生。為防止這種焦油狀物質(zhì)進(jìn)入毛細(xì)柱造成污染而使柱性能下降,，可采用保護(hù)預(yù)柱,，即在裂解器與毛細(xì)柱之間接一填充預(yù)柱，通過控制預(yù)柱溫度而使焦油狀物質(zhì)滯留在預(yù)柱內(nèi),，預(yù)柱可置于GC氣化室內(nèi),，這樣既容易控制溫度，又減少系統(tǒng)的死體積,，當(dāng)然,，預(yù)柱填料需經(jīng)常更換,。
十,、問：我zui近更換了另一種牌號的ODS柱,，雖然分離情況仍可以，但保留時間不能重現(xiàn),，為什么?
這是因為被分析物可能具有形成氫鍵的能力,。盡管過去幾年來，填料的制造技術(shù)有了極大的提高,，但不同的廠商的ODS填料表面硅醇基的濃度不同,。正是這些硅醇基可能與樣品發(fā)生相互作用。因此,，同一被分析物中的各組分在不同牌號的ODS柱上的相對保留時間就可能不同,。在流動相中加入少量競爭物，如三乙基胺(TEA),，將會使硅醇基的成鍵能力飽和,，從而能保證不同牌號柱子上的相對保留時間具有較好的重現(xiàn)性。
十一,、問：我購買的HPLC柱驗收測試時柱壓過高,，請問為什么?
柱壓過高是HPLC柱用戶zui常碰到的問題。其原因有多方面,，而且常常并不是柱子本身的問題,，您可按下面步驟檢查問題的起因：
1. 拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高,，否則是保護(hù)柱的問題,，若柱壓仍高，再檢查;
2. 把色譜柱從儀器上取下,，看壓力是否下降,，否則是管路堵塞，需清洗,，若壓力下降,，再檢查;
3. 將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子,，(此時不要連接檢測器,，以防固體顆粒進(jìn)入流動池)。這時,，如果柱壓仍不下降,，再檢查;
4. 更換柱子入口篩板，若柱壓下降,，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì),，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升,。若柱壓還高，請與廠商,。
一般情況下,，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題，SGE提供的Rheodyne7315型過濾器就是解決這一問題的*選擇,。
十二,、問：高溫毛細(xì)柱的使用壽命一般為多長?
毛細(xì)柱壽命除決定于柱子本身的性能外，在很大程度上取決于使用情況,，如使用溫度,、樣品狀態(tài)，進(jìn)樣量等,，如果在其使用溫度范圍內(nèi),，樣品干凈，色譜柱不被污染的情況下,，柱子壽命一般在2～3年之間,。
十三、問：如毛細(xì)管柱被污染,，柱效和分辨率降低,，有何方法使它恢復(fù)?是否可通過老化來解決?
根據(jù)柱污染程度可采取不同的方法來解決，如果污染不嚴(yán)重,，污染物沸點不是太高,，可通過老化來解決，但老化溫度不可超過柱子的zui高使用溫度,，且一般要較長時間(8～30)小時;如果污染較嚴(yán)重,，或通過老化仍不能使柱性能恢復(fù)，那就必須采用溶劑清洗,，通常是用5倍柱容積的溶劑(如正戊烷,，二氯甲烷等)通過色譜柱。當(dāng)然,，清洗熔劑用的越多,，對柱性能的損壞越大，清洗完后,，在通載氣老化一定時間,，如果柱性能恢復(fù)，便可繼續(xù)使用,。
必須指出：只有交聯(lián)柱才能清洗,，對于非交聯(lián)柱，清洗柱子會*失效,，因為固定液被洗掉了,，至于清洗用溶劑的選擇,，可參考說明書。
十四,、問：BPX70毛細(xì)柱是否可用于GC/MS分析?
*可以,。BPX70為極性柱，使用溫度范圍寬(25～260℃),，程序升溫可達(dá)290℃,，流失低,，適合于分析脂肪酸甲酯的的各種位置和幾何異構(gòu)體,，藥物異構(gòu)體，碳水化合物等,。因BPX70為交聯(lián)柱,，故用于GC/MS很穩(wěn)定，污染后可清洗再生,。