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DNS（二硝基水楊酸）比色法還原糖含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)
點(diǎn)擊次數(shù)：1811 發(fā)布時(shí)間：2014-7-11
還原糖的測(cè)定實(shí)驗(yàn)是生化技術(shù)中基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn),，是生化課程中必須掌握的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)，不明白還原糖的測(cè)定原理,、測(cè)定方法,？本文羅列了DNS還原糖含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理、步驟,、DNS試劑的制備,、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、樣品的測(cè)定,。
一,、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/em>
DNS(二硝基水楊酸)比色法還原糖含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)和了解還原糖和總糖測(cè)定的基本原理、比色法測(cè)定還原糖的操作步驟和分光光度計(jì)的使用方法,。
二,、實(shí)驗(yàn)原理
還原糖的測(cè)定是糖定量測(cè)定的基本方法。
還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類,。單糖都是還原糖,，雙糖和多糖不一定是還原糖，例如乳糖和麥芽糖是還原糖,，蔗糖和淀粉是非還原糖,。利用各種糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖,、雙糖和多糖分別提取出來,。對(duì)非還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成還原性單糖進(jìn)行測(cè)定,，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量(常以葡萄糖含量計(jì)),。
還原糖在堿性條件下加熱可被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，而氧化劑3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi),，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系,，利用分光光度計(jì)在540nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度值，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算,，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量,。由于多糖水解為單糖時(shí)，每斷裂一個(gè)糖苷鍵需加入一分子水,，所以在計(jì)算多糖含量時(shí)應(yīng)乘以系數(shù)0.9,。
三、DNS試劑的制備
將6.3克DNS和262ml 2mol/L氫氧化鈉,，加到500ml含有182克酒石酸鉀鈉的熱水溶液中,，再加上5克重苯酚和5克亞硫酸鈉，攪拌溶解,，冷卻后加水定容到1000ml,，即制成3,5-二硝基水楊酸試劑，貯于棕色瓶中備用,。
四,、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
分別取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(1mg/ml)0、0.2,、0.4,、0.6、0.8,、1.0ml于25 ml試管中,，分別準(zhǔn)確加入DNS試劑2ml，沸水浴加熱2min,，流水冷卻,，用水補(bǔ)足到15ml刻度。在540nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度,。
五,、樣品的測(cè)定
樣品液適當(dāng)稀釋，使糖濃度為0.1-1.0mg/ml,，取稀釋后的糖液1.0ml于15ml刻度試管中,，加DNS試劑2.0ml，沸水煮沸2min,，冷卻后用水補(bǔ)足到15ml刻度,，在540nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出葡萄糖mg/ml數(shù),。求出樣品中糖含量,。
為生化實(shí)驗(yàn)報(bào)告發(fā)愁的同學(xué)，不妨看看這篇文章，希望對(duì)大家有用,。其實(shí)zui主要的是要熟知DNS還原糖含量測(cè)定原理,，至于實(shí)驗(yàn)試劑配制、操作步驟,，這些都大同小異,，機(jī)械式的操作。只有掌握了原理才能明白為什么要這樣做,，操作中必須注意的事項(xiàng),。