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公司Taq DNA聚合酶屬性介紹
點擊次數(shù)：1000 發(fā)布時間：2014-7-8
(一)酶活性與熱穩(wěn)定性
該酶基因全長2496個堿基,，編碼832個氨基酸,，酶蛋白分子為 94KDa.其比活性為200000單位/mg.75～80℃時每個酶分子每秒鐘可延伸約150個核苷 酸，70℃延伸率大于60個核苷酸/秒,，55℃時為24個核苷酸/秒.溫度過高(90℃以上) 或過低(22℃)都可影響Taq DNA聚合酶的活性,，該酶雖然在90℃以上幾乎無DNA合成， 但確有良好的熱穩(wěn)定性,，在PCR循環(huán)的高溫條件下仍能保持較高的活性.在92.5℃,、95℃ 、97.5℃時,，PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分別經130min,，40min和5～6min后，仍可 保持50%的活性,，實驗表明.pcr反應時變性溫度為95℃～20sec,，50個循環(huán)后，Taq DNA聚合酶仍有65%的活性.Taq DNA聚合酶的熱穩(wěn)定性是該酶用于PCR反應的前提條 件,，也是PCR反應能迅速發(fā)展和廣泛應用的原因.Taq DNA聚合酶還具有逆轉錄活性,， 其作用于類似逆轉錄酶.此活性溫度一般為65～68℃，有Mn2+存在時,，其逆轉錄活性 更高.
(二)離子依賴性
aqDNA聚合酶是Mg2+依賴性酶,，該酶的催化活性對Mg2+濃度非常敏感.以活性程度 很低的鮭魚精子DNA為模板，dNTP的濃度為0.7～0.8mmol/L時,，用不同濃度Mg2+進行 PCR反應10min,，測定結果為Mgcl2濃度在2.0mmol/L時該酶催化活性zui高，此濃度能zui 大限度地激活TaqDNA聚合酶的活性,，Mg2+過高就抑制酶活性,，當Mgcl2濃度在 10mmol/L時可抑制40～50%的酶活性.由于Mg2+能與dNTP結合而影響PCR反應液中游離 的Mg2+濃度，因而Mgcl2的濃度在不同的反應體系中應適當調整,，優(yōu)化濃度.一般反應 中Mg2+濃度至少應比dNTP總濃度高0.5～1.0mmol/L.適當濃度的KCL能使Taq DNA聚合 酶的催化活性提高50～60%,，其zui適濃度為50mmol/L，高于75mmol/L時明顯抑制該酶 的活性.
(三)忠實性
taqDNA聚合酶具有5"→3"聚合酶活性和5"→3"外切酶活性,，而無3"→5"外切活 性,，它不具有Klenow酶的3"→5"校對活性.因而，在PCR反應中如發(fā)生某些堿基的錯 配,，該酶是沒有校正功能的.Taq DNA聚合酶的堿基錯配機率為2.1×10-4.
(四)抑制劑
低濃度的尿素,、甲酰胺、二甲基甲酰胺(DMF)和二甲基亞砜(DMSO)對Taq DNA聚合酶的 催化活性并無影響.極低濃度的離子表面活性劑如脫氧膽胺酸鈉(小于0.06%),，十二烷 基肌氨酸鈉(小于0.02%),，十二烷基硫酸鈉(SDS，小于0.01%)幾乎可*抑制該酶的 活性.而非離子表面活性劑在較高濃度(Tween20,，NP-40.和Tritox-100)如>5%時方能 抑制該酶的活性.
變性劑對TaqDNA聚合酶活性的影響
變性劑 | 濃度 | 活性(%) |
乙醇 | ≤3% | 100 |
| 10% | 110 |
尿素 | ≤0.5mol/L | 100 |
| 1.0mol/L | 118 |
| 1.5mol/L | 107 |
| 2.0mol/L | 82 |
DMSO | ≤1% | 100 |
| 10% | 53 |
| 20% | 11 |
DMF | ≤5% | 100 |
| 10% | 82 |
| 20% | 17 |
甲酰胺 | ≤1% | 100 |
| 15% | 86 |
| 20% | 39 |
SDS | 0.001% | 105 |
| 0.01% | 10 |
| 0.1% | <0.1
|
低濃度的NP-40(0.05%)和Tween20(0.05%)能增強TaqDNA聚合酶的活性.低濃度SDS對 該酶的抑制作用可加入一定濃度的NP-40和Tween20抵消.TaqDNA聚合酶可在-20℃貯 存至少6個月.