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技術(shù)文章
士鋒生物凝膠層析法蛋白質(zhì)脫鹽
點(diǎn)擊次數(shù)：1678 發(fā)布時間：2014-7-2
一,、原理：含鹽蛋白質(zhì)溶液流經(jīng)凝膠層析柱時,，低相對分子量的鹽分子因浸入凝膠顆粒的微孔中，所以向下移動的速度較慢,；而大分子的蛋白質(zhì)不能進(jìn)入凝膠顆粒的微孔,，以較快的速度流過凝膠柱，從而使蛋白質(zhì)與鹽分開,。
二,、材料與試劑：葡聚糖凝膠（Sephadex G25）、洗脫液（蒸餾水或適宜的緩沖溶液）,、含鹽的蛋白質(zhì)溶液,、蛋白質(zhì)檢測試劑、無機(jī)鹽檢測試劑（依具體情況而定）
三,、操作方法
1,、凝膠的準(zhǔn)備：稱取葡聚糖5g，加入80ml洗脫液（可用水或適宜的緩沖液）,，在沸水浴中溶脹30min,，用傾瀉去懸浮的小顆粒。然后裝進(jìn)內(nèi)徑1－1.2cm,，高30－40cm的玻璃柱內(nèi),。注意裝填均勻，無氣泡和裂紋存在,，并保持液面在凝膠表面以上,。
2、加樣與洗脫：打開柱的出口，讓柱內(nèi)的液體慢慢流出,，直至液面與凝膠床表面相平,，然后加入2ml含鹽蛋白質(zhì)溶液，至樣品液面剛好到達(dá)凝膠床表面時,，加入30ml洗脫液（與溶脹和裝柱時所用液體*相同）,，以0.5－1ml/min的流速洗脫，每5ml裝試管分布收集,。
3,、收集的蛋白質(zhì)溶液可用280nm處的紫外光吸收法檢測，也可用福林酚測定,。而鹽根據(jù)具體的鹽確定檢測方法,。