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血清三酰甘油的含量測定
點擊次數(shù)：1188 發(fā)布時間：2014-6-26
三酰甘油的主要生理功能是儲能和供能，主要分布在皮下,、腹腔大網(wǎng)膜,、腸系膜、內臟周圍等脂肪組織中,。在血清中,，內源性三酰甘油主要以VLDL的形式運輸，外源性三酰甘油主要以CM的形式運輸,。在正常成人空腹血脂中,，三酰甘油的含量為0.11～1.69(均值為1.13)。血脂的含量受膳食,、種族,、性別、年齡,、職業(yè),、運動狀況、生理狀態(tài)以及激素水平等多因素影響,，波動范圍較大,。例如：青年人血漿膽固醇水平低于老年人，某些疾病時,，血脂含量有很大變化,，如糖尿病和動脈粥樣硬化的患者，血脂一般都明顯升高,。因此,，測定血脂的含量在臨床上具有重要的意義。
用正庚烷-異丙醇聯(lián)合抽提血中的三酰甘油,，再用KOH皂化抽提液,，生成甘油，然后用過碘酸鈉氧化甘油,，生成甲醛,，zui后甲醛與乙酰丙酮及氨縮合，生成帶黃色熒光的3,5 —二乙酰—1,4—雙氫二甲基吡啶,。
【器材和試劑】
1.器材 試管及試管架,、混勻器、恒溫水浴箱,、微量加樣器,、吸量管、吸耳球、可見光分光光度計,、比色杯,、記號筆。
2.試劑
(1)新鮮血清,。
(2)抽提劑為正庚烷—異丙醇(2∶3.5)(V／V),。
(3)0.04mol/L H2SO4溶液。
(4)異丙醇,。
(5)皂化試劑：6.0g KOH溶于60ml蒸餾水中,，加異丙醇10ml混合，置棕色瓶中,室溫
保存,。
(6)氧化試劑：650mg過碘酸鈉溶于約100ml蒸餾水中,，加入77g醋酸銨，溶解后再加
入60ml冰醋酸,，加水至1000ml,，置棕色瓶中室溫保存。
(7)乙酰丙酮試劑：0.4ml乙酰丙酮加異丙醇至100ml,，置棕色瓶中,，室溫保存。
(8)三酰甘油標準液：稱取三酰甘油酯1.00g于100ml容量瓶中,，加抽提劑至刻度,此為儲存標準液(10g／L),。臨用時，再以抽提劑稀釋10倍,，即得1g/L應用液,，冰箱保存。
【操作步驟】
1.取干試管3支,，編號,，按下表準確加入試劑：
試劑
空白管
標準管
測定管
血清（ml）
—
—
0.2
標準液（ml）
—
0.2
—
蒸餾水（ml）
0.2
—
—
抽提劑（ml）
2
2
2
0.04mol/LH2SO4(ml)
0.6
0.6
0.6
邊加邊搖，加畢劇烈振搖25min,，然后靜置分層,。
2.另取3支同樣編號的干試管，各加上層液0.3～0.5ml（三管液量相等）,，再加異丙醇
2ml及皂化劑0.4ml,，立即搖勻，于65℃保溫5min,。
3.各管加入氧化劑2ml及乙酰丙酮試劑2ml,，充分混勻。至65℃水浴保溫15min,，用
冷水冷卻,，以420nm波長或藍色濾光片比色,，以空白管校正零點，讀取各管吸光度,。
【計算】
血清三酰甘油mmol/L＝（測定管吸光度/標準管吸光度）×0.2×100÷0.2×0.011
＝（測定管吸光度/標準管吸光度）×1.1
正常值=0.22～1.21mmol/L
【附注】
1.本試驗受檢者需空腹12～14小時,。
2.乙酰丙酮的吸收峰在波長415nm左右。
3.計算公式中的0.11為mg/L換算成mmol/L的系數(shù),。
4.本法用廉價庚烷作為與異丙醇的混合抽提劑。此外,，如辛烷或壬烷以及沸程在 98.4～150.70℃的石油醚均可采用,。故抽提劑也可用汽油-異丙醇。