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士鋒生物薄層色譜法介紹
點擊次數(shù)：1235 發(fā)布時間：2014-6-24
薄層色譜具有設(shè)備簡單,、速度快、分離效果好,、靈敏度高以及能使用腐蝕性顯色劑等優(yōu)點,，是一種微量的分離分析方法。它可以與光譜或質(zhì)譜結(jié)合起來,，是一種很有發(fā)展前途的分析技術(shù),。
薄層色譜是把吸附劑或支持物（如氧化鋁、硅膠和纖維素粉等）均勻地鋪在一塊玻璃板上形成薄層,，將分離樣品滴加在薄層的一端，當(dāng)流動相沿著含有固定相的支持物上移動時,，被分離組分就在固定相與流動相之間進行分配或吸附,，經(jīng)過反復(fù)無數(shù)次的分配平衡或吸附平衡，zui后按照各個組分的差異而被分離,。
三,、基本操作
薄層色譜中，鋪薄層的板可用玻璃板,，也可用塑料板,。鋪在板上的吸附劑（或支持物）可分為加粘合劑的硬板和不加粘合劑的軟板。薄層色譜技術(shù)包括制板,、點樣,、展開,、顯色等步驟。現(xiàn)分述如下：
1. 薄層板的制備
薄層板制備的好壞直接影響色譜的結(jié)果,，薄層應(yīng)盡量鋪得均勻,，厚度在0.25～0.5mm之間。
硅膠和氧化鋁的粘性差,，使用前必須加粘合劑,。市售的硅膠G 和氧化鋁G 均已含有粘合劑半水石膏，可直接加入水調(diào)勻后鋪層,。
薄層色譜法
（a）1-玻璃板,； 2-厚度墊板； 3-吸附劑,； 4-有機玻璃尺
（b）1-玻璃板,； 2-玻璃條； 3-有機玻璃尺,； 4-吸附劑
（c）1-玻璃板,； 2-玻璃棒； 3-控制厚度的金屬絲,； 4-吸附劑
圖2.55 薄層板涂布法
薄層的涂布有傾斜法和平鋪法等多種方法,。傾斜法是將調(diào)勻的糊狀物倒在玻璃板上，用手搖晃,，使其表面均勻光滑,，然后靜置固化。平鋪法是將調(diào)勻的糊狀物,，倒在玻璃板的一端,，用一根均勻的玻璃棒（直徑0.6～0.8cm），兩端各繞一根不銹鋼細絲（0.2～0.3mm）或鎳鉻絲,，將糊狀物均勻平鋪,，即可涂布成均勻的一層。涂布的時間,、推移的速度力求均勻一致,，一次推移完畢，不宜來回操作,，如（圖2.55c）,。按上述方法涂好板后，靜置讓其固化晾干,。
經(jīng)室溫干燥的薄層還要活化,，所謂“活化”就是在高溫除去水分，硅膠薄層和纖維薄層要在110℃下干燥1 小時,，氧化鋁薄層在80℃烘烤半小時,，聚酰胺薄層要在110℃下干燥5min,。活化后的薄層應(yīng)放在干燥器內(nèi)保存,。
2. 點樣
用毛細管或微量注射器取樣品溶液,，在上述制好的薄層板一端約1.5cm 處，,，垂直地輕輕地接觸到薄層上的吸附劑,，樣品溶液就可靠到薄層上。應(yīng)分次點下,，不可一次點得太多,，不然樣品點直徑太大，樣點直徑一般以2～4mm 為宜,。在定性和定量分析時,，同一薄層上的樣點直徑應(yīng)一致。