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士鋒生物雙向電泳的技術(shù)流程和樣品制備
點(diǎn)擊次數(shù)：1152 發(fā)布時(shí)間：2014-6-17
基因組學(xué)
蛋白質(zhì)組學(xué)：可視為分子生物學(xué)的大規(guī)模篩選技術(shù)，目的在于歸類細(xì)胞中的蛋白質(zhì)的整體分布,，鑒定并分析感興趣的個(gè)別蛋白,，zui終闡明它們的關(guān)系與功能。
上述兩種學(xué)科的研究?jī)?nèi)容在互補(bǔ)的水平上研究了細(xì)胞的分子架構(gòu),，又都在各自的水平上提供了增強(qiáng)對(duì)方效應(yīng)的信息,，因此二者存在有很強(qiáng)的且?guī)в邢到y(tǒng)性相互關(guān)系。
Applications of proteomics
• Protein identification/characterization
• Protein-protein interaction
• Post-translational modifications
• SubCellular location
• Elucidation of pathway
• Target validation and toxicology
• Drug discovery
蛋白質(zhì)組分析的首要要求
將來自于全細(xì)胞,、組織或生物體中所包含的多達(dá)幾千種混合蛋白質(zhì)進(jìn)行分離,、檢測(cè)和分析 。
2-DE技術(shù)依然是大多數(shù)蛋白質(zhì)組研究中分離復(fù)雜蛋白質(zhì)混合物的技術(shù) ,。
雙向電泳的技術(shù)流程和樣品制備
雙向電泳的技術(shù)流程和樣品制備
雙向電泳分析中的樣品制備
制備原則：
應(yīng)使所有待分析的蛋白樣品全部處于溶解狀態(tài)（包括多數(shù)疏水性蛋白）,，且制備方法應(yīng)具有可重現(xiàn)性。
防止樣品在聚焦時(shí)發(fā)生蛋白的聚集和沉淀,。
防止在樣品制備過程中發(fā)生樣品的抽提后化學(xué)修飾（如酶性或化學(xué)性降解等）,。
*去除樣品中的核酸和某些干擾蛋白。
盡量去除起干擾作用的高豐度或無(wú)關(guān)蛋白,，從而保證待研究蛋白的可檢測(cè)性,。
不同樣品的基本處理方法
可溶性樣品
固體組織樣品
細(xì)胞
樣品的分級(jí)處理：
通過采用亞細(xì)胞分級(jí)、液相電泳和選擇性沉淀等方法對(duì)蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行分級(jí)處理，可降低樣品的復(fù)雜性并富集低豐度蛋白質(zhì),。當(dāng)前zui簡(jiǎn)單有效的處理是采用分級(jí)抽提,，按樣品溶解度不同進(jìn)行分離。