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士鋒生物原位雜交與熒光原位雜交
點(diǎn)擊次數(shù)：1056 發(fā)布時(shí)間：2014-6-4
一、原位雜交( In Situ Hybridization,ISH)
是用標(biāo)記的核酸探針,，使用非放射檢測(cè)系統(tǒng)或放射自顯影系統(tǒng),，在組織切片、細(xì)胞涂片及染色體制片上等對(duì)核酸進(jìn)行定性,、定位和相對(duì)定量研究的一種分子生物學(xué)方法,，具有靈敏、特異,、直觀等優(yōu)點(diǎn),。已逐漸成為分子生物學(xué)和分子病理學(xué)的常見(jiàn)技術(shù)之一，廣泛應(yīng)用于腫瘤生物學(xué),、血液病理學(xué),、遺傳、微生物學(xué),、細(xì)胞和分子生物學(xué)、神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué),、免疫學(xué)等領(lǐng)域及治療評(píng)估和預(yù)后判斷等研究中,。
菌落原位分子雜交：是指將轉(zhuǎn)化或感染后的菌落印影在濾膜上，用堿裂解,，中和后洗凈烘干,，再用目的基因的放射性DNA或mRNA作探針(Probe)進(jìn)行雜交放射自顯影，凡出現(xiàn)黑點(diǎn)的菌落即應(yīng)中選,。
二,、熒光原位雜交(Fluorescence in situ Hybridization)
是原位雜交技術(shù)大家族中的一員,，因其所用探針被熒光物質(zhì)標(biāo)記（間接或直接）而得名，該方法在80年代末被發(fā)明,，現(xiàn)已從實(shí)驗(yàn)室逐步進(jìn)入臨床診斷領(lǐng)域,。基本原理是熒光標(biāo)記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火溫度下復(fù)性,；通過(guò)工業(yè)區(qū)光顯微鏡觀察熒光信號(hào)可在不改變被分析對(duì)象（即維持其原位）的前提下對(duì)靶核酸進(jìn)行分析,。DNA熒光標(biāo)記探針是其中zui常用的一類核酸探針。利用此探針可對(duì)組織,、細(xì)胞或染色體中的DNA進(jìn)行染色體及基因水平的分析,。在該領(lǐng)域中產(chǎn)品頗具名氣的公司之一為美國(guó)Vysis公司，它是一家專業(yè)生產(chǎn)FISH產(chǎn)品的公司,，其產(chǎn)品涉及到熒光標(biāo)記探針,，雜交，檢測(cè)用試劑,，雜交用儀器,，觀察分析用儀器用及軟件等，幾乎涵蓋FISH技術(shù)所需的所有試劑和設(shè)備,。
熒光標(biāo)記控針不對(duì)環(huán)境構(gòu)成污染,，靈敏度能得到保障，可進(jìn)行多色觀察分析,，因而可同時(shí)使用多個(gè)探針,，縮短因單個(gè)探針?lè)珠_(kāi)使用導(dǎo)致的周期過(guò)程和技術(shù)障礙。Vysis公司的熒光標(biāo)記探針均為直接法標(biāo)記,，可省去信號(hào)放大系統(tǒng),，減少試劑投入且保障更大程度的特異性，同時(shí)也有信號(hào)清晰,，背景低及方法簡(jiǎn)單易于操作等優(yōu)點(diǎn),。