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士鋒生物纖維素酶活力的測(cè)定
點(diǎn)擊次數(shù)：1166 發(fā)布時(shí)間：2014-5-29
纖維素酶是一種多組分酶,，包括C1 酶,、CX 酶和¦Â-葡萄糖苷酶三種主要組分。其中C1酶的作用是將天然纖維素水解成無(wú)定形纖維素,，CX 酶的作用是將無(wú)定形纖維素繼續(xù)水解成纖維寡糖,，¦Â-葡萄糖苷酶的作用是將纖維寡糖水解成葡萄糖。纖維素酶水解纖維素產(chǎn)生的纖維二糖,、葡萄糖等還原糖能將堿性條件下的3,5-二硝基水楊酸（DNS）還原,，生成棕紅色的氨基化合物，在540nm 波長(zhǎng)處有zui大光吸收,，在一定范圍內(nèi)還原糖的量與反應(yīng)液的顏色強(qiáng)度呈比例關(guān)系,，利用比色法測(cè)定其還原糖生成的量就可測(cè)定纖維素酶的活力。
三,、實(shí)驗(yàn)材料,、主要儀器和試劑
1．實(shí)驗(yàn)材料
（1）纖維素酶制劑 500mg
（2）新華定量濾紙 50mg / 份 × 4
（3）脫脂棉花 50mg / 份 × 4
（4）羧甲基纖維素鈉（CMC） 510mg
（5）水楊酸苷 500mg
2．主要儀器
（1）722 型或其他型號(hào)的可見分光光度計(jì)
（2）恒溫水浴2 臺(tái)
（3）沸水浴鍋
（4）電爐子
（5）剪刀
（6）萬(wàn)分之一分析天平
（7）恒溫干燥箱
（8）冰箱
（9）試管架
（10）膠頭滴管
（11）具塞刻度試管 20mL×24
（12）移液管或加液器 0.5 mL×3；2mL×7
（13）容量瓶 100 mL×6,；1000 mL×3
（14）量筒 50 mL×2,；100 mL×1；500 mL×1
（15）燒杯 100 mL×6,；500mL×3,；1 000 mL×1
3．試劑（均為分析純）
（1）濃度為1mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液
將葡萄糖在恒溫干燥箱中105℃下干燥至恒重，準(zhǔn)確稱取100mg 于100mL 小燒杯中,，用少量蒸餾水溶解后,，移入100mL 容量瓶中用蒸餾水定容至100mL，充分混勻,。4℃冰箱中保存（可用12～15 天）。
（2）3,5-二硝基水楊酸（DNS）溶液
準(zhǔn)確稱取DNS 6.3g 于500mL 大燒杯中,，用少量蒸餾水溶解后,，加入2mol/L NaOH 溶液262mL,，再加到500mL 含有185g 酒石酸鉀鈉（C4H4O6KNa · 4H2O，MW=282.22）的熱水溶液中,，再加5g結(jié)晶酚（C6H5OH,，MW=94.11）和5g無(wú)水亞硫酸鈉（Na2SO3，MW=126.04）,，攪拌溶解,，冷卻后移入1 000mL 容量瓶中用蒸餾水定容至1 000mL，充分混勻,。貯于棕色瓶中,，室溫放置一周后使用。
（3）0.05 mol/L pH4.5 的檸檬酸緩沖液A 液（0.1 mol/L 檸檬酸溶液）：準(zhǔn)確稱取C6H8O7 · H2O（MW=210.14）21.014g 于500mL大燒杯中,，用少量蒸餾水溶解后,，移入1 000mL 容量瓶中用蒸餾水定容至1 000mL，充分混勻,。4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/em>