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士鋒生物固定化酵母細(xì)胞及蔗糖酶的檢測
點(diǎn)擊次數(shù)：1374 發(fā)布時(shí)間：2014-5-20
固相酶又稱為固定化酶,，是通過物理及化學(xué)的處理方法,，使水溶性酶和固態(tài)的水不溶性支持物(或載體)相結(jié)合而制備的。通過酶的固定化可以將酶轉(zhuǎn)變成不溶物同時(shí)仍保留酶的活力,，在催化反應(yīng)中具有諸多水溶性酶所不具備的優(yōu)點(diǎn),。
常用的酶的固定化方法主要有：
1. 物理吸附法；
2.載體偶聯(lián)法(鍵結(jié)合法),；
3.交聯(lián)法,；
4.包埋法；
就其應(yīng)用技術(shù)而言,，又分為固定化酶和固定化細(xì)胞二種,。
相對于水溶性酶，固定化酶的優(yōu)點(diǎn)主要是機(jī)械強(qiáng)度增加,，穩(wěn)定性提高,，可回收反復(fù)使用。
三,、儀器和試劑
儀器
試管,、1毫升吸管4支、水浴鍋,。
試劑
1. 海藻酸鈉若干克,；
2. K號酵母液；
3. 10％蔗糖液：稱取10克蔗糖用水定容至100毫升,；
4. 斐林甲,、乙液。
四,、操作步驟
l,、稱取海藻酸鈉1克加入100毫升水中，微火加熱溶解后冷卻到30℃左右,，將預(yù)先準(zhǔn)備好的3克卡氏酵母(或K號酵母的培養(yǎng)液30毫升)的懸液加入混勻,。 然后倒入下邊裝有膠管與止血夾的漏斗中,，讓其慢慢滴入4％氯化鈣溶液中，制成直徑2－3毫米的球形固定化酵母,。
將此固定化酵母裝入柱中,，從柱上端加入10％的蔗糖液,，控制一定的流速(10－17滴／分鐘),。先流出的水解液要回流10分鐘。zui后所得流出液即為經(jīng)固定化K號酵母水解的糖液,，其成分為葡萄糖和果糖的混合液,。
2、蔗糖酶的檢測
吸取斐林甲,、乙液各1毫升于干燥試管中,，加入水解液1毫升，沸水中保溫,，觀察顏色反應(yīng),。有氧化亞銅沉淀的則說明蔗糖已被水解，管中有蔗糖酶的存在,。
空白以10％蔗糖液做對照,，其它同上。