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士鋒生物天然產(chǎn)物中多糖的分離,、純化與鑒定
點擊次數(shù)：848 發(fā)布時間：2014-5-5
多糖類物質(zhì)是除蛋白質(zhì)和核酸之外的又一類重要的生物大分子,。早在60年代，人們就發(fā)現(xiàn)多糖復雜的生物活性和功能,。它可以調(diào)節(jié)免疫功能,，促進蛋白質(zhì)和核酸的生物合成，調(diào)節(jié)細胞的生長,，提高生物體的免疫力,，具有抗腫瘤、抗瘍和抗愛滋病(AIDS)等功效,。
由于高等真菌多糖主要是細胞壁多糖,，多糖組分主要存在于其形成的小纖維網(wǎng)狀結(jié)構交織的基質(zhì)中，利用多糖溶于水而不溶于醇等有機溶劑的特點,，通常采用熱水浸提后用酒精沉淀的方法,，對多糖進行提取。影響多糖提取率的因素很多,，如：浸提溫度,、時間、加水量以及脫除雜質(zhì)的方法等都會影響多糖的得率,。
多糖的純化,，就是將存在于粗多糖中的雜質(zhì)去除而獲得單一的多糖組分。一般是先脫除非多糖組分,，再對多糖組分進行分級,。常用的去除多糖中蛋白質(zhì)的方法有：Sevag法、三氟三氯乙烷法,、三氯醋酸法,，這些方法的原理是使多糖不沉淀而使蛋白質(zhì)沉淀，其中Sevag方法脫蛋白效果較好，它是用氯仿：戊醇或丁醇,，以4：1比例混合,，加到樣品中振搖，使樣品中的蛋白質(zhì)變性成不溶狀態(tài),，用離心法除去,。
本實驗采用Sevag法(氯仿：正丁醇＝4：1混合搖勻)進行脫蛋白，用DEAE Sepharose層析柱進行純化,，然后合并多糖高峰部分,，濃縮后透析，凍干,，得多糖級分,。
試劑和器材
一、試劑
平衡緩沖溶液：0.01mol/L Tris-HCL, PH=7.2,。
洗脫液：A: 0.1mol NaCl, 0.01 mol Tris-HCl PH=7.2; B: 0.5mol NaCl, 0.01 mol Tris-HCl PH=7.2,。
氯仿、正丁醇,、乙醇(95％)等,，均為分析純。
二,、材料
灰樹花子實體,。
三、
器材
DEAE Sepharose Fast Flow,，旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)儀,，搖床，離心機,，層析柱：26×10,。
操作方法
一、粗多糖的提取
將多糖子實體切碎烘干后稱量,，采用熱水浸提法,，每次原料和水之比均為1：5，浸提溫度為70℃－80℃,，浸提時間3－5h,，共提取4次，合并4次浸提液,。真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮,，濃縮一倍體積。對多糖提取液需進行脫色處理,，即以1％的比例加入活性炭,，攪拌均勻15min后過濾即可,。在濃縮液中加入3倍體積的乙醇攪拌，沉淀為多糖和蛋白質(zhì)的混合物,，此為粗多糖,。 它只是一種多糖的混合物，其中可能存在中性多糖,、酸性多糖,、單糖、低聚糖,、蛋白質(zhì)和無機鹽,，必須進一步分離純化。