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士鋒生物黃酮的分離與測定
點(diǎn)擊次數(shù)：858 發(fā)布時間：2014-5-4
黃酮類化合物是植物的重要次生代謝產(chǎn)物,，也是一些保健品和中藥材的有效成分之一。黃酮類化合物的定量方法常用的有hplc法和分光光度法,，在實(shí)際生產(chǎn)和科研過程中,，對于黃酮單體的定量常采用HPLC法，而對總黃酮的測定,，考慮到方法的簡便,、快捷以及可行性，多采用在堿性介質(zhì)中加鋁鹽顯色的分光光度法,。在堿性條件下黃酮類化合物與鋁鹽形成絡(luò)合物,、在500nm波長處有zui大吸收峰。標(biāo)準(zhǔn)品選用蘆丁,。
試劑和器材
一,、試劑
蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品。
5％NaNO2,；10%A1(NO3)3,；5％NaOH,；70％乙醇。
二,、材料
新鮮銀杏葉,。
三、器材
容量瓶10ml（×7）,，25ml（×1）,，100ml（×2）；吸管0.5ml（×2）,，1ml（×2）,，2ml（×1），5ml（×1）,；分光光度計,。
操作方法
一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品5mg,，用70％乙醇溶解,，定容于25mL容量瓶中，搖勻,，得0．2mg／mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,。
吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.2,、0.4,、0.6、0.8,、1.0,、1.2mL，分別置于10mL容量瓶中,，加入5％NaNO2 0.4mL,，搖勻，放置6min,；加入10%A1(NO3)30.4mL,，搖勻，放置6min,；加入5％NaOH 4.0mL,，再加水至刻度，搖勻,，放置15min,。以試劑空白作為參比溶液。用1cm比色皿,，在500nm波長處測定吸光度,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
二、總黃酮的提取
把新鮮的銀杏葉低溫烘干,，使水分小于8％,，制成干粉。稱取干粉1．0g,，置于100mL容量瓶中,，加入70％乙醇30mL，浸泡24h,。超聲波提取30min,，過濾，濾液用70％乙醇定容于100mL容量瓶中,，得到黃酮提取液,，待用。
三,、測定
吸取黃酮提取液1.00mL, 置于10mL容量瓶中,，加入5％NaNO3 0.4mL，搖勻,，放置6min；加入10%A1(NO3)300.4mL,，搖勻,，放置6min；加入5％NaOH 4.0mL,，再加水至刻度,，搖勻，放置15min,。以試劑空白作為參比溶液,。用1cm比色皿，在500nm波長處測定吸光度,，由標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算總黃酮含量,。
注意事項
對于某些熱敏成分的提取，采用超聲波破碎法效果較為理想,。由于此過程是一個物理過程,，浸提過程中無化學(xué)反應(yīng)，被浸提的生物活性物質(zhì)在一定時間內(nèi)保持不變,。