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士鋒生物免疫電泳實(shí)驗(yàn)介紹
點(diǎn)擊次數(shù)：840 發(fā)布時(shí)間：2014-4-15
免疫電泳（ immunoelectrophoresis ）是將電泳和瓊脂擴(kuò)散結(jié)合起來(lái)，用于分析抗原組成的一種定型方法,，具有靈敏快速的優(yōu)點(diǎn),。該實(shí)驗(yàn)可分為如下兩個(gè)步驟（圖 6-1 ）：
1. 電泳 將待檢的可溶性物質(zhì)在瓊脂板上進(jìn)行電泳分離。由于各種可溶性蛋白分子的大小,、質(zhì)量與所帶電荷不同,，在電場(chǎng)的作用下，其帶電分子的運(yùn)動(dòng)速度具有一定的規(guī)律,，因此通過(guò)電泳能夠把混合物中的各種不同成分分離開(kāi),。
2. 瓊脂擴(kuò)散 電泳后在瓊脂槽中加入相應(yīng)抗血清，然后置濕盒內(nèi)進(jìn)行雙擴(kuò)散,。當(dāng)抗原與抗體相遇且比例適合時(shí),，可形成不溶性復(fù)合物，出現(xiàn)特異性沉淀線,，根據(jù)沉淀線的數(shù)量和位置,，可鑒定分析各種抗原成分及其性質(zhì)。
【材料】
1. 抗原：正常人血清,；抗體：兔抗人血清,。
2. 1% 離子瓊脂（用離子強(qiáng)度 0.05 、 pH8.6 的巴比妥緩沖液配制）,。
3. 載玻片,、直徑 3mm 的打孔器,、 2 × 6 × 6 聚苯乙烯塑料條、微量加樣器,、電泳儀,、吸管等。
【方法】
1. 制瓊脂板 載玻片放于水平臺(tái)面上,，將塑料條放置于玻片中央,，吸取 4ml 熱熔的 1% 離子
瓊脂于其上，待凝固后,，取出塑料條,，即制成瓊脂槽。再按圖 6-2 打孔,。
2. 加樣 用微量加樣器往孔中加正常人血清,。
3. 電泳 電壓 4V/cm ，電泳 1.5 小時(shí),。
4. 瓊脂擴(kuò)散 在瓊脂槽內(nèi)加入兔抗人血清,，使其充滿槽內(nèi)，置濕盒內(nèi) 3 7 ℃ 擴(kuò)散 24 小時(shí),，觀察結(jié)果,。
【結(jié)果觀察】
在瓊脂槽的兩邊出現(xiàn)相對(duì)稱的弧形沉淀線。
【注意事項(xiàng)】
1. 電泳擴(kuò)散后可直接在黑色背景下,，用斜射光觀察,。
2. 電泳時(shí)，搭橋應(yīng)*緊密接觸,，以免因電流不均而發(fā)生沉淀線彎曲,。