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士鋒生物細(xì)菌接種技術(shù)及生長表現(xiàn)
點(diǎn)擊次數(shù)：916 發(fā)布時(shí)間：2014-4-1
由于細(xì)菌感染而致病的各種標(biāo)本及帶菌者所需檢查的各種標(biāo)本,，往往并非單一的細(xì)菌,，而混有其它非致病菌（人體正常菌群）,。因此當(dāng)對此標(biāo)本須作出細(xì)菌鑒定時(shí)，就必須從標(biāo)本中分離出致病菌,，稱為細(xì)菌分離培養(yǎng)技術(shù),。另外，對已得到可疑病菌進(jìn)行細(xì)菌鑒定及菌種保存等培養(yǎng),，稱為純培養(yǎng)接種技術(shù),。
（一）平板劃線接種法（又稱分離培養(yǎng)法）
平板劃線接種法為zui常用的分離培養(yǎng)細(xì)菌的方法，通過平板劃線后,，可使細(xì)菌分散生長,，形成單個(gè)菌落，有利于從含有多種細(xì)菌的標(biāo)本中分離出目的菌,。平板分離劃線的方法較多,，其中以分區(qū)劃線法與曲線劃線法較為常用。其目的都要使細(xì)菌呈現(xiàn)單個(gè)菌落生長,，便于同雜菌菌落鑒別?，F(xiàn)只介紹分區(qū)劃線法。
1,、右手持接種環(huán),，經(jīng)火焰滅菌，待涼后,，挑取大腸桿菌（或葡萄球菌）培養(yǎng)物少許,。
2、左手斜持瓊脂平板,，皿蓋留在桌上,，于火焰近處將菌涂于瓊脂平板上端，來回劃線,，涂成薄膜（約占平板總表面積的1/10）,，劃線時(shí)接種環(huán)與平板表面成30~40º角，輕輕接觸,，以腕力在平板表面行輕快地滑移動(dòng)作,，接種環(huán)不應(yīng)劃破培養(yǎng)基表面。
3,、燒灼接種環(huán),，殺滅環(huán)上殘留細(xì)菌，待冷（是否冷卻,，可先在培養(yǎng)基邊緣處試觸,，若瓊脂溶化，表示未涼，稍等再試）,，從薄膜處取菌作連續(xù)平行劃線,，約占平板表面1/5左右，再次燒灼接種環(huán),，等三次平行劃線……以同樣方法作第四次,，第五次劃線，將平板表面劃完,。
4,、劃線完畢，蓋上平皿蓋,，底面向上,，用標(biāo)簽或臘筆注明菌名檢驗(yàn)號碼，接種者信息等,，置37℃孵育培養(yǎng)24小時(shí)后觀察結(jié)果,。
（二）純培養(yǎng)細(xì)菌接種法（斜面培養(yǎng)基接種法：用于培養(yǎng)，保存菌種及其它實(shí)驗(yàn)用）
1,、取一支斜面培養(yǎng)基及一支純菌種管,，并排傾斜放在左手四指中拇指壓住并以手掌支住兩試管底部。右手將白金環(huán)于火焰上滅菌,、冷卻,。并拔起兩試管的棉塞。（勿放置桌上,，如棉塞太緊時(shí)應(yīng)預(yù)先松動(dòng)）,。
2、試管口部于火焰上往返通過2~3次滅菌,，將滅菌白金環(huán)伸入有菌試管中,，取少量細(xì)菌（一般應(yīng)從斜面底部沾取）,，然后小心移至準(zhǔn)備接種的試管中,。
3、接種方法是自管底向上連續(xù)平劃線,，若以保存菌為目的時(shí)可自管底上劃一粗直線即可,。
4、取出接種環(huán),，將試管上部再經(jīng)火焰滅菌,，塞好棉塞，接種環(huán)滅菌后放回原處,。
5、若自平皿培養(yǎng)物中取菌時(shí)，只應(yīng)沾取一個(gè)單個(gè)菌落,。
6,、接種菌應(yīng)作好標(biāo)記，標(biāo)明菌種名稱,，日期等,，置37℃溫箱中培養(yǎng)，次日觀察結(jié)果,。
液體培養(yǎng)基接種法：用于增菌及鑒定細(xì)菌生長特點(diǎn),，如表面生長，沉淀生長,，均勻混濁生長等,。操作技術(shù)基本與上法相同，只是接種時(shí)應(yīng)將沾菌之接種環(huán)沿接近液體表面之管內(nèi)壁輕輕摩擦（勿用力振蕩）使細(xì)菌混入培養(yǎng)基內(nèi),，置37℃溫箱中培養(yǎng),，次日觀察結(jié)果。
（三）半固體培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)法
用于保存菌種及間接觀察細(xì)菌之動(dòng)力（無動(dòng)力之細(xì)菌僅沿穿刺線生長,，清晰可見,；有動(dòng)力的細(xì)菌使培養(yǎng)基呈現(xiàn)混濁樣，穿刺線甚至難以看出）,。
用無菌操作技術(shù),，滅菌穿刺針沾取細(xì)菌后，垂直刺入半固體培養(yǎng)基中央直達(dá)近管底處,，再沿原穿刺線抽出即可,，置37℃溫箱培養(yǎng)，次日觀察結(jié)果,。