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士鋒生物蘇云金桿菌的部分生化試驗鑒定
點擊次數(shù)：1263 發(fā)布時間：2014-3-20
一,、目的要求：
應(yīng)用生物化學(xué)技術(shù)對昆蟲病原細菌進行鑒定,，乃是一種十分簡便快速的方法，鑒定蘇云金桿菌的生化指標(biāo)是：V、P反應(yīng),，卵磷脂酶,，蛋白水解，吐溫酶,，水楊素,，七葉靈、蔗糖,、甘露糖,、表膜、酶,、淀粉,、幾丁質(zhì)酶、精氨酸脫羥酶等,。本實驗是通過簡單的生化測定來了解蘇云金桿菌的生化鑒定技術(shù),。
二、實驗材料：
1,、 天平 2,、電爐 3、藥勺4,、量筒5,、燒杯6、pH試紙7,、高壓鍋（手提式）8,、接種環(huán)
三、實驗內(nèi)容：
1,、各種糖,、 糖 利用：
蛋白胨 1%
瓊脂 2%
蔗糖（甘露糖） 1%（水楊素為0.5%）
1%酸性復(fù)紅水溶液 0.5%
蛋白胨加熱溶于水中，加入酸性復(fù)紅水溶液,。分別加入一種糖加熱溶解,，以不加糖的蛋白胨作對照。分裝試管,，調(diào)pH至7.58磅滅菌30分鐘,。
接種后于30℃恒溫培養(yǎng)檢查產(chǎn)酸情況，若培養(yǎng)基變紅者為正反應(yīng),。
2,、 七葉靈利用：
牛肉膏 1%
七葉靈 0.5%
瓊脂 2%
另配5%三氯化鐵水溶液單獨滅菌。培養(yǎng)基溶后,，先將三氯化鐵每皿滴入2滴,，后倒平板混勻,。凝固后電接菌種,，30 ℃培養(yǎng)3-5天,。菌苔周圍出現(xiàn)深褐色區(qū)為陽性反應(yīng)。
3,、 淀粉水解試驗：
牛肉膏 5克 NaCl 5克 可熔性淀粉 5克 瓊脂 10克 蒸餾水 1000毫升
將試驗菌點種于平板上,，徒長出菌落后，收Lugoc氏碘液傾注于平板表面,，菌落四周有透明圈者為陽性放應(yīng),。
4、V,、P反應(yīng)：
蛋白胨5克 葡萄糖5克 NaCl 5克 蒸餾水 1000毫升
分裝試管 8磅30分鐘滅菌
接菌后于37 ℃培養(yǎng)24小時,，每管加入4%KOH溶液10-20滴，再加等量的5%的一萘酚乙醇水溶液后,，用力振蕩,。然后置37 ℃下保溫0.5小時。培養(yǎng)物出現(xiàn)紅色即為V,、P正反應(yīng),，并設(shè)未接種的試管為對照。
5,、 卵磷脂酶試驗
蛋白胨1% 酵母膏 0.3% NaCl 0.5% 瓊脂 2% 卵黃2-3% pH 7-7.2
用75%酒精將新鮮雞蛋進行表面消毒,，并用經(jīng)火焰滅菌的鑷子將蛋兩端各打一個孔，傾去蛋清,，然后用無菌5ml吸管取出卵黃,，加至觸化后冷卻至50。C左右的培養(yǎng)基中,，使卵黃含量為培養(yǎng)基總體積的2~3%,。混勻后倒平板,，點接菌種24小時后觀察,，菌液邊緣出現(xiàn)混濁圈者表示卵鱗酯酶為陽性。
6．菌膜形成試驗：
肉湯試管接種,，30,。C靜止培養(yǎng)24小時后觀察菌膜形成情況及搖動后膜破粹情況。