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士鋒生物管碟法測(cè)定抗生素效價(jià)
點(diǎn)擊次數(shù)：1144 發(fā)布時(shí)間：2014-3-17
原理
抗生素的生物檢定是以抗生素對(duì)微生物的抗菌效力作為效價(jià)的衡量標(biāo)準(zhǔn)，具有與應(yīng)用原理相一致,、用量少和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),。管碟法是瓊脂擴(kuò)散法中的一種，已被各國藥典廣泛采用,，作為法定的抗生素生物檢定方法,。
當(dāng)抗生素在菌層培養(yǎng)基中擴(kuò)散時(shí)，會(huì)形成抗生素濃度由高到低的自然梯度,，即擴(kuò)散中心濃度高而邊緣濃度低,。因此，當(dāng)抗生素濃度達(dá)到或高于MIC（zui低抑制濃度）時(shí),，試驗(yàn)菌就被抑制而不能繁殖,，從而呈現(xiàn)透明的抑菌圈。根據(jù)擴(kuò)散定律的推導(dǎo),，抗生素總量的對(duì)數(shù)值與抑菌圈直徑的平方成線性關(guān)系,。
三、實(shí)驗(yàn)材料
1,、四環(huán)素類抗生素的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品,。
2、試驗(yàn)菌：藤黃八疊球菌（Sarcina lutea）,。
3,、培養(yǎng)基：250ml三角瓶分裝150ml LB瓊脂，150ml三角瓶分裝50ml LB瓊脂,，50ml三角瓶分裝20ml藤黃八疊球菌懸液用培養(yǎng)液,。
4、滅菌物品：培養(yǎng)皿,，牛津杯（內(nèi)徑：6.0±0.1mm,，外徑：7.8±0.1mm，高度：10.0±0.1mm）,，滴管，1ml吸管,，pH6.0的磷酸緩沖液,，彎頭鑷子，15×150mm試管,，瓦蓋,。
5、其它：分析天平,，容量瓶,，玻璃板，水平儀,，游標(biāo)卡尺,。
四,、實(shí)驗(yàn)實(shí)施
1、配制標(biāo)準(zhǔn)品溶液
2,、配制樣品溶液
3,、制備菌懸液。
4,、制備平板：
（1）取6套無菌培養(yǎng)皿,，分別加入約20mlLB培養(yǎng)基后，置水平玻璃板上凝固,，作為底層,。
（2）另取冷卻至50℃左右的50ml LB培養(yǎng)基，加入1ml試驗(yàn)菌懸液,，迅速搖勻后,，用10ml破口吸管取6ml混菌培養(yǎng)基倒在底層平板上，作為菌層,，并放置在水平玻璃板上凝固,。
5、在培養(yǎng)基平板底部作好相應(yīng)標(biāo)記,，用彎頭鑷子在每個(gè)培養(yǎng)皿中等距離放入4個(gè)牛津杯,。
6、用滴管分別將高,、低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品溶液加入到牛津杯中,，以滴滿為度，換上皿蓋,。
7,、將培養(yǎng)皿平穩(wěn)送入恒溫箱，37℃下培養(yǎng)16～18h,。
8,、用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑