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技術(shù)文章
士鋒生物免疫組化問題及解決辦法
點(diǎn)擊次數(shù)：878 發(fā)布時(shí)間：2014-1-14
1、染色過強(qiáng)
原因 | 解決辦法 |
| 抗體的濃度過高或抗體孵育時(shí)間過長 | 降低抗體滴度（一般指濃縮性抗體）抗體孵育時(shí)間：室溫1小時(shí)或4℃ |
| 孵育溫度過高,，孵育溫度超過37℃ | 一般室溫20-28℃ |
| DAB顯色時(shí)間過長或DAB濃度過高 | 顯色時(shí)間不能超過5-10分鐘,，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn) |
2、非特異性背景染色
原因 | 解決辦法 |
| 操作過程中沖洗不充分 | 每步?jīng)_洗3×5 |
| 組織中含過氧化物酶未阻斷 | 可再配置新鮮3%H2O2封閉,，孵育時(shí)間延長 |
| 組織中含內(nèi)源性生物素 | 正常非免疫動物血清再封閉 |
| 血清蛋白封閉不充分 | 延長血清蛋白封閉時(shí)間 |
3,、染色弱
原因 | 解決辦法 |
| 抗體濃度過低，孵育時(shí)間過短 | 提高抗體濃度,，孵育時(shí)間不能少于60分鐘 |
| 試劑超過有效使用期 | 及時(shí)更換試劑 |
| 操作中,，滴加試劑時(shí)緩沖液未瀝干，致使試劑稀釋 | 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液（但防止切片干燥） |
| 室溫太低,，低于15℃ | 若室溫低于15度,，要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘（或4℃冰箱） |
| 蛋白封閉過度 | 封閉時(shí)間不要超過10分鐘 |
4、染色陰性
原因 | 解決辦法 |
| 操作步驟錯誤 | 重新試驗(yàn),，設(shè)立陽性對照 |
| 組織中無抗原 | 設(shè)立陽性對照片,，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 一抗與二抗種屬連接錯誤 | 仔細(xì)確定一抗與二抗種屬無誤 |