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士鋒生物雜交瘤細胞的制備
點擊次數(shù)：832 發(fā)布時間：2014-1-9
1） 瘤細胞培養(yǎng)（無特殊要求）
骨髓瘤細胞呈懸浮或輕微附著形式生長,，如附著性生長的細胞多時,，用吸管輕輕吹打或輕輕叩擊培養(yǎng)容器即可分離下來。通常要維持細胞于指數(shù)生長期（細胞培養(yǎng)時間為15~20小時）,，每3~5天取細胞0.2~1ml移入到10ml新培養(yǎng)液中,，其zui大細胞密度不能超過5×105~106/ml。一般使用含有高糖的Dmem培養(yǎng)液,，并補加有pH的穩(wěn)定劑HEPES,。
2）免疫小鼠和脾細胞的制備
免疫：取6~8周齡Balb/C雌鼠,，基礎免疫2周，靜脈再加強免疫一次,，3~5天后用于融合,。
脾細胞制備：
1．引頸處死小鼠，用酒精消毒表體,。
2．無菌條件下取出脾臟,，剃除結締組織和脂肪，用5ml無血清培養(yǎng)液沖洗一次,。
3．把脾臟置于已消毒的90~100目不銹鋼網(wǎng)或尼龍紗網(wǎng)中,。
4．在脾中部切開一小口，用注射器芯從一端輕輕壓擠,，再用無血清培養(yǎng)液沖洗,，令細胞通過紗網(wǎng)，收集入平皿中,，或用注射器向脾臟內注入3 ml無血清培養(yǎng)液,，反復抽吸數(shù)次方法獲取細胞，再制成細胞懸液亦可,。
5．把細胞懸液注入50ml離心管中,，加10~20ml培養(yǎng)液，輕輕吹打數(shù)次,，室溫中置5分鐘,。
6．離心（800~1000轉/分）計數(shù)，備用,。
3）飼細胞的制備：常用小鼠胸腺細胞或小鼠的腹腔細胞
小鼠腹腔細胞制備方法：
1．引頸處死小鼠,，用酒精消毒表體。
2．切開腹部皮膚剝向兩側,，暴露出腹壁,。
3．用無菌7號針頭注射器，吸取3ml無血清培養(yǎng)液,。
4．用小鑷夾起腹壁,，注入3ml無血清培養(yǎng)液，用手反復輕輕揉腹壁,，再反復抽吸3~5次,。
5．收集末次吸得的細胞，注入50ml的離心管中,，再加20ml無血清培養(yǎng)液,，用吸管漂洗一次。
6．離心,，去上清,，用含血清培養(yǎng)基調節(jié)細胞濃度為2×105/ml,，接種入培養(yǎng)板中，24孔板每孔加0.1ml,。