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技術文章
士鋒生物蛋白質醋酸纖維薄膜電泳實驗步驟
點擊次數(shù)：1385 發(fā)布時間：2013-8-14
一,、原理：蛋白質分子在一定的PH條件下，由于基團解離而帶有一定的電荷,，在含有緩沖液的醋酸纖維薄膜上,，受電場作用而以一定的速度向一定的方向移動。不同的蛋白質分子,，由于所帶的電荷不同,，移動的方向或速度不同，從而達到分離,。
二,、材料與試劑：電泳儀、醋酸纖維薄膜,、PH8.6巴比妥緩沖液（稱取10.30g巴比妥1.84g,，溶于1000ml蒸餾水中，或者稱取10.3g巴比妥鈉,，加1M鹽酸8ml,，加蒸餾水至1000ml）,、染色液（氨基黑10B1g溶于10ml冰醋酸與90ml甲醇的混合液中）、洗滌液（冰醋酸10ml加甲醇90ml,，或者甲醇50ml,，冰醋酸10ml，加蒸餾水40ml）,、透明液（甘油溶液,，或用苯甲醇（折光率1.54），水楊酸甲酯（折光率1.54）等溶液）,、微量注射器、蛋白質樣品液
三,、操作方法
1,、醋酸纖維薄膜的準備：將醋酸纖維薄膜切成10×2.5cm的膜條，浸于巴比妥緩沖液中約30min,，充分浸透至無白點,，取出用濾紙吸去多余的緩沖液。
2,、點樣：用微量注射器將5ul蛋白質樣品點在薄膜條中央,。
3、電泳：將薄膜條置于電泳儀的支架上,，拉直膜條,，兩端與濾紙條相接，將濾紙浸入到緩沖溶液中,，緩沖液兩槽應在同一水平面上,，加蓋密封，平衡10min,。接通電源,，以10-25V/cm的電場強度電泳0.5-1h。
4,、顯色：電泳完畢后,，取出濾紙條在氨基黑染色液中染色5-10min，然后用漂洗液洗4-5次,，直至區(qū)帶清晰為止,。