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人c-myc癌基因產物（c-myc）elisa試劑盒說明書
點擊次數：1224 發(fā)布時間：2013-5-1
人c-myc癌基因產物（c-myc）酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定人血清,，血漿及相關液體樣本中c-myc癌基因產物（c-myc）的含量,。本公司專業(yè)供應Elisa試劑盒，*,，*,，可免費提供代測服務，咨詢：,， :
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人c-myc癌基因產物（c-myc）水平,。用純化的人c-myc癌基因產物（c-myc）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入c-myc癌基因產物（c-myc）,，再與HRP標記的c-myc抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的c-myc癌基因產物（c-myc）呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人c-myc癌基因產物（c-myc）含量,。
試劑盒組成：
| 試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
| 說明書 | 1份 | 1份 | |
| 封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | |
| 密封袋 | 1個 | 1個 | |
| 酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2 |
| 標準品：1800pg/mL | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2 |
| 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2 |
| 酶標試劑 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2 |
| 樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2 |
| 顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2 |
| 顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2 |
| 終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2 |
| 濃縮洗滌液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2 |
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,，保存過程中如出現沉淀,，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,。檢測細胞內的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。
5. 組織標本：切割標本后,，稱取重量。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?/span>2
6. 標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于
7. 不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl,，然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后從*孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五、第六孔中,，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻,；混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1200 pg/mL,，800pg/mL ,，400 pg/mL，200 pg/mL,，100pg/mL）,。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用,。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
注意事項：
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果。
3． 各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,，如標本數量多,，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）,。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6． 底物請避光保存,。
7． 嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9． 本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標，
在坐標紙上繪出標準曲線,，根據樣品的OD
值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋
倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值
代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋
倍數,，即為樣品的實際濃度。
（此圖僅供參考）
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上,。
2.批內與批間應分別小于9%和11%
檢測范圍：
30pg/mL -1600pg/mL
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：,；2
2．有效期：6個月