會(huì)員.png)
QQ交談
您所在位置：請(qǐng)輸入產(chǎn)品關(guān)鍵字：
郵編：200431
聯(lián)系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機(jī)：13122441390 15900755943
留言：發(fā)送留言
個(gè)性化：www.shifengsj.com
網(wǎng)址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://sorrent.com.cn/st236594/
技巧;醋酸纖維膜電泳詳細(xì)說明
點(diǎn)擊次數(shù)：1730 發(fā)布時(shí)間：2013-4-12
醋酸纖維膜電泳是一項(xiàng)簡便而又迅速的方法,。它的優(yōu)點(diǎn)是：①電泳區(qū)帶分離清楚,，比瓊脂平板電泳分辨率高;②可以定量;③樣品用量少，只需要幾微升即可,。
（一）材料與試劑
1.pH8.6離子強(qiáng)度0.05巴比妥緩沖液
2.0.5%氨基黑染色液
3.透明液：冰醋酸 3 份 ;95%乙醇 2 份 混合即可
4.醋酸纖維膜
（二）操作方法
1.將醋酸纖維膜條浸于巴比妥緩沖液中,，浸透后用竹鑷子夾到濾紙上，吸去過多的水分,。將膜的光滑面向下搭在電泳槽兩側(cè)的濾紙橋上,，注意搭平。
2.加樣 用微量加樣器于負(fù)1.5cm處加樣1µl～3µl,，注意樣品要成一條直線且垂直方向,。也可用血球計(jì)數(shù)板蓋玻片蘸取樣品輕輕點(diǎn)上。
3.電泳 電壓10V/cm～15V/cm或0.4mA/cm～0.6mA/cm電泳45min～60min,，至電泳區(qū)帶展開約2.5cm～3.5cm時(shí),，關(guān)閉電源。
4.染色 將膜浸于氨基黑染色液中，染色數(shù)分鐘,。
5.透明 將染色的醋酸纖維膜浸于透明液中,，漂洗5min ~10min，至背景呈乳白色為止,。為了防止膜上出現(xiàn)許多氣泡,，可以逐漸升高透明液濃度10%、20%以至30%,。
6.結(jié)果觀察及保存 透明后,，將膜貼于玻璃上，干后取下,，即可觀察結(jié)果并保存,。
7.定量 將各區(qū)帶剪下，分別浸于4Mol/L NaOH 4ml中,，振搖數(shù)次,，約2h，色澤被浸出,，于580nm～620nm比色,，測出各區(qū)帶的OD值。同時(shí)剪一塊大小相似無蛋白的透明膜同樣處理,，做為對(duì)照,。
計(jì)算各區(qū)帶蛋白含量百分比（以血清為例）
總OD值T=A α1 α2 β γ
白蛋白%=A/T×100%
以此類推。
（三）注意事項(xiàng)
1.醋酸纖維膜孔隙小,，含水量少,，且較薄，因此它對(duì)熱很敏感,，故應(yīng)注意控制電壓,、電流。
2.樣品不可過多,，只需幾微升即可,。
3.加樣一定要呈直線、垂直,、分布均勻,，這樣泳動(dòng)的區(qū)帶整齊、不歪,。
4.注意醋酸纖維膜的質(zhì)量,，浸泡很久仍有大塊白色硬點(diǎn)者可棄之不用。