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技術(shù)講解：細(xì)胞融合的方法及誘導(dǎo)物
點(diǎn)擊次數(shù)：1761 發(fā)布時(shí)間：2013-4-11
同種細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)2個(gè)靠在一起的細(xì)胞自發(fā)合并，稱自發(fā)融合;異種間的細(xì)胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合,，稱誘發(fā)融合,。
仙臺(tái)病毒法融合
①兩種細(xì)胞在一起培養(yǎng)，加入病毒,，在4℃條件下病毒附著在細(xì)胞
膜上,。并使兩細(xì)胞相互凝聚;
②在37℃中，病毒與細(xì)胞膜發(fā)生反應(yīng),，細(xì)胞膜受到破環(huán),，此時(shí)需
要Ca2+和Mg2+，zui適PH為8.0一8.2;
②細(xì)胞膜連接部穿通,，周邊連接部修復(fù),，此時(shí)需Ca2+和ATP;
④融合成巨大細(xì)胞，仍需ATP ,。
聚乙二醇（PEG）法
聚乙二醇（PEG）結(jié)構(gòu)為：HOH2C（CH20CH2）nCH2OH,，分子量大于200小于6000者均可用作細(xì)胞融合劑。PEG經(jīng)高壓滅菌后,，與溫?zé)岬腅ngle氏液混合,。通常用分子量低于1000的PEG作融合劑，50%PEG溶液能產(chǎn)生zui多雜交細(xì)胞,。PEG溶液在pH6.0時(shí)細(xì)胞融合率zui高,。
電融合法
在直流電脈沖的誘導(dǎo)下，細(xì)胞膜表面的氧化還原電位發(fā)生改變,，使異種細(xì)胞粘合并發(fā)生質(zhì)膜瞬間破裂,，進(jìn)而質(zhì)膜開(kāi)始連接，直到閉和成完整的膜,，形成融合體,。
優(yōu)點(diǎn)：融合率高、重復(fù)性強(qiáng),、對(duì)細(xì)胞傷害小;
裝置精巧,、方法簡(jiǎn)單、可在顯微鏡下觀察或錄像觀察融合過(guò)程;
免去PEG誘導(dǎo)后的洗滌過(guò)程,、誘導(dǎo)過(guò)程可控性強(qiáng),。
融合誘導(dǎo)物
細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多.常用的主要有生物法用滅活的仙臺(tái)病毒（Sendai virus），化學(xué)法如用聚乙二醇（Polyethyleneglycol,，PEG）和物理法如電脈沖,。目前應(yīng)用zui廣泛的是聚乙二醇，因?yàn)樗椎?、?jiǎn)便,，且融合效果穩(wěn)定。PEG的促融機(jī)制尚不*清楚,，它可能引起細(xì)胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團(tuán)發(fā)生結(jié)構(gòu)重排,。動(dòng)植物細(xì)胞融合方法不同，生物法利用滅活仙臺(tái)病毒是動(dòng)物細(xì)胞融合所*的,。
自發(fā)條件下或人工誘導(dǎo)下, 兩個(gè)不同基因型的細(xì)胞或原生質(zhì)體融合形成一個(gè)雜種細(xì)胞,。基本過(guò)程包括細(xì)胞融合導(dǎo)致異核體（heterokaryon）的形成, 異核體通過(guò)細(xì)胞有絲分裂導(dǎo)致核的融合, 形成單核的雜種細(xì)胞,。有性生殖時(shí)發(fā)生正常的細(xì)胞融合, 即由兩個(gè)配子融合成一個(gè)合子,。
細(xì)胞融合不僅可用于基礎(chǔ)研究，而且還有重要的應(yīng)用價(jià)值,，在植物育種方面已經(jīng)成功的有蘿卜+甘藍(lán),、粉藍(lán)煙草+郎氏煙草、番茄+馬鈴薯等等,。細(xì)胞融合另一個(gè)重要應(yīng)用就是制備單克隆抗體,，單克隆抗體可以用作診斷試劑，治療疾病和運(yùn)載藥物,，具有準(zhǔn)確,，，簡(jiǎn)易,，快速等優(yōu)點(diǎn),。