會(huì)員.png)
QQ交談
您所在位置：請(qǐng)輸入產(chǎn)品關(guān)鍵字：
郵編：200431
聯(lián)系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機(jī)：13122441390 15900755943
留言：發(fā)送留言
個(gè)性化：www.shifengsj.com
網(wǎng)址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://sorrent.com.cn/st236594/
封閉劑在細(xì)胞免疫熒光中的應(yīng)用步驟
點(diǎn)擊次數(shù)：2515 發(fā)布時(shí)間：2013-4-7
I,、步驟：
一,、固定：
PBS 5min×3次 振蕩洗滌制作好的細(xì)胞爬片,。
固定液覆蓋細(xì)胞，RT 靜置15min,。
PBS 5min×3次 振蕩洗滌,。
二、通透化：
通透液覆蓋細(xì)胞,，RT 靜置30min,。
PBS 5min×3次 振蕩洗滌。
三,、封閉：
封閉液覆蓋標(biāo)本表面37℃孵育1h,。
四、一抗孵育：
一抗以合適濃度稀釋PBS,，覆蓋標(biāo)本表面,。
4℃孵育過(guò)夜，第二天37℃復(fù)溫1h,。
PBS 5min×3次 振蕩洗滌,。
五、二抗孵育：
FITC標(biāo)記二抗以合適濃度稀釋于PBS,，覆蓋標(biāo)本表面,。
37℃避光孵育<60min。
PBS 5min×3次 避光 振蕩洗滌,。
六,、染核：
新鮮稀釋Hoechst覆蓋細(xì)胞表面，RT避光靜置<10min,。
PBS 5min×3次 避光 振蕩洗滌,。
七、封片：
在干凈的載玻片上滴一滴封片劑,，將爬片的細(xì)胞面扣在封片劑上。
八,、鏡檢,，4℃避光保存。
II,、注：
1,、細(xì)胞密度要合適，狀態(tài)較好,。
2,、從孵育二抗開始要避光（關(guān)閉室內(nèi)日光燈即可）。
3,、完成后及時(shí)鏡檢,，照相;分別用不同波長(zhǎng)激發(fā)熒光,，在Photoshop軟件下合成一張圖。
III,、試劑配制：
1,、固定液：4%多聚甲醛/PBS：
4g多聚甲醛，50～80mlPBS,，加熱至60℃,，持續(xù)攪拌至*溶解，（通常需滴加少許1n NaOH才能使溶液清亮）,，定容100ml,，RT保存。
2,、通透液：0.5 %（v/v）TritonX-100/PBS
3,、封閉液：正常山羊血清稀釋于PBS;或商品化封閉液成品。
4,、Hoechst：Hoechst33258即可,。
5、封片劑：50%（v/v）甘油/PBS,。