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技術(shù)文章
薄層色譜法實(shí)踐技巧大總結(jié)
點(diǎn)擊次數(shù)：1886 發(fā)布時(shí)間：2013-2-18
1. 藥典：薄層色譜法系將供試品溶液點(diǎn)于薄層板上，在展開容器內(nèi)用展開劑展開,，使供試品所含成分分離,，所得色譜圖與事宜的對照物按同法所得的色譜圖對比，并可用薄層掃描儀進(jìn)行掃描,，用于鑒別,、檢查或含量測定。
2. 如果你是做鑒別的話,，薄層的系統(tǒng)適用性主要是做檢測限和分離度;
3. 如果你是做含量測定,，比如說用薄層掃描法，薄層的系統(tǒng)適用性應(yīng)該做線性范圍,、同板精密度,、異板精密度、回收率;
4. 手工鋪制的板子,，只適宜于定性分析,，不宜于分離定量;
5. 化學(xué)藥一般是作有關(guān)物質(zhì)，需要一定的載藥量,，所以要適當(dāng)增加厚度;
6. 中藥一般較難分離,，需要薄板，以增加分離度;
7. 手工鋪制的板子常用的有：硅膠G板和硅膠CMC-Na板,。前者是煅石膏（石膏經(jīng)140℃烘烤3—4小時(shí)）與硅膠按1—1.3：10混合均勻,。每份硅膠G加水2—3份調(diào)成糊狀，即可使用,。后者的操作各位大蝦已有論述,。
8. 如果你鋪板目的是做分析用的話,，肯定得很仔細(xì)用心;如果僅是天然藥化那種粗略檢查過柱子得到的餾分純度，那就沒有必要這么復(fù)雜了,，也就是說速度可以快點(diǎn)，板的要求也沒有必要這么高;
9. 單純的手鋪板,，技巧要求很高的,，如果有鋪板器（也是*手動(dòng)的那種），鋪出的板子基本上可以保證均一的,。
10. 要噴硫酸乙醇并定量的鋪水板;鋪水板是zui考技術(shù)的,，主要是碾磨技術(shù)，大家可以探討一下;
11. 硫酸乙醇顯色作定量分析的品種,，但凡加了CMC-Na的板都易烘糊,，尤其是溫度高于100度時(shí)，后改用不加CMC輔的水板來作,，就不會(huì)有烘糊現(xiàn)象,，故也可推論CMC易于與硫酸起糊化反應(yīng)。感覺輔水板關(guān)鍵是硅膠G與水的比例要達(dá)1：3.5左右,，而且研磨后要盡快涂布,，不能易于凝固而難于涂布。
展開：
12. 藥典：展開容器應(yīng)使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸,，并有嚴(yán)密的蓋子,，底部應(yīng)平整光滑，或有雙槽,。上行展開一般可用適合薄層板大小的平底或雙槽展開缸,，展開時(shí)須能密閉。水平展開用的水平展開缸,。
13. 藥典：將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中,，浸入展開劑的深度為距原點(diǎn)5mm為宜（切勿將樣點(diǎn)侵入展開劑中），密封頂蓋,，待展開至規(guī)定距離,，除另有規(guī)定外，一般為8～15 cm,，溶劑前沿達(dá)到規(guī)定的展距,，取出薄層板，晾干,，按正文項(xiàng)下的規(guī)定檢測,。
14. 展開劑的選擇（分離單體）：
（1）粗分，也就是當(dāng)你的樣品極性范圍比較大的時(shí)候,，可以直接采用極性較小的流動(dòng)相,。然后將前沿、原點(diǎn)以及前沿及原點(diǎn)間的硅膠分別刮下，提取,。這樣,，樣品就被分為幾個(gè)部分，而各個(gè)部分的極性相差也比較小了,。然后再將這幾部分分別進(jìn)行下面的細(xì)分TLC,。
（2）細(xì)分。經(jīng)過粗分之后,，我們一般對各個(gè)部分的極性都能夠做到心中有數(shù)了,。比如，被沖到前沿的樣品,，要采用更小極性強(qiáng)度的流動(dòng)相,，而死吸附部分，則需要較大強(qiáng)度的流動(dòng)相,。
我們在初步確定了流動(dòng)相的極性強(qiáng)度之后,，可以自己設(shè)計(jì)幾個(gè)溶劑系統(tǒng)。在選擇流動(dòng)相的組成的時(shí)候,，可以參考snyder的溶劑分類,，從質(zhì)子受體，質(zhì)子給體和偶極作用的溶劑中各選擇一種,，然后再選擇一個(gè)強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑,。當(dāng)然，也可以參考文獻(xiàn)中采用的流動(dòng)相,。選好了要用的流動(dòng)相,，就可以根據(jù)我們初步確定的極性強(qiáng)度得到流動(dòng)相的配比了（如果是二元流動(dòng)相的話）。如果是三元及以上的流動(dòng)相,，可以采用Glajch和Youngstrom的七種溶劑系統(tǒng)的方案進(jìn)行選擇流動(dòng)相的配比,。然后從中選擇分離效果比較好的組合。
zui開始可以采用微量圓環(huán)法（將樣品點(diǎn)在中間,，然后將流動(dòng)相用毛細(xì)管從原點(diǎn)向圓周擴(kuò)散）和小板實(shí)驗(yàn)法來摸索,，然后再應(yīng)用于大的制備TLC。
我也曾直接采用圓環(huán)法,，也稱為環(huán)形展開,，來進(jìn)行制備的。本來是應(yīng)該有專門的U形展開室來展開,，但是因?yàn)槲覀冞@里沒有這個(gè)設(shè)備,，所以我一般采用簡易的方法：即將樣品點(diǎn)在中央，然后用尖頭的滴管*的向圓心滴加流動(dòng)相的,。樣品會(huì)分出不同的同心圓而得到分離,。這樣的好處有三：（1）只要操作小心,，各個(gè)同心圓真的就非常圓，即不會(huì)出現(xiàn)線性層析中的邊緣效應(yīng)等,。（2）分離效果更好,，拖尾現(xiàn)象小于線性層析。（3）由于圓心式展開的Rfc是線性展開的Rf的平方根,，要大于線性展開的Rf,，所以分的更開。弊端在于將各個(gè)組分從板上刮下的時(shí)候需更小心才不會(huì)使之混雜,。
15. 當(dāng)展開劑極性差別很大時(shí)，特別是極性大的成分所占比例很小時(shí),，往往會(huì)出現(xiàn)溶劑脫混現(xiàn)象,。在這種情況下，展開槽飽和與不飽和差別沒有顯著性差異,，薄層板上往往會(huì)出現(xiàn)類似分層的現(xiàn)象,，所以只有換展開系統(tǒng)來調(diào)整。
16. 甲醇用量較小,，而甲醇又易揮發(fā),，容易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，要特別注意展開劑的平衡和層析缸的密封,。
17. 如果經(jīng)過一次展開后,展開槽內(nèi)仍剩下足夠的展開劑,可以展開第二塊板子嗎?
個(gè)人認(rèn)為不要,。一般來說為得到較好的分離效果，應(yīng)先飽和一下,，第二次使用如果還要飽和就會(huì)造成另一側(cè)殘留的展開劑附著在板子上,，造成影響。而且有機(jī)溶劑一般較易揮發(fā),。
18. 自己手鋪的薄層板怎么都沒有買來的板好用,，用過之后也可以用極性大些的展開劑將展開的點(diǎn)，二次展開跑過,，這樣就可以重復(fù)利用了,。
顯色：
19. 藥典：顯色裝置噴霧顯色要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細(xì)霧狀噴出;浸漬顯色可用的玻璃器皿或用適宜的玻璃缸代替;蒸氣熏蒸顯色可用雙槽玻璃缸或適宜大小的干燥器代替。
20. 說關(guān)于薄層板加熱變黑的問題,，其實(shí)很容易解決：當(dāng)噴完顯色劑后不用在放烘箱里烘了,，可以用電吹風(fēng)在板子背面吹吹就能顯色了。我們實(shí)驗(yàn)室里一般都采用此法,，簡便,、快潔.如果一非想使用烘箱烘的話，一定要用帶玻璃窗的,，當(dāng)看到顯色了就取出,，不然不好控制顯色時(shí)間,，時(shí)間過長，CMC容易碳化變黑,。
21. 根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn),，薄層版變黑與CMC-Na的濃度過大有關(guān)，如果你留意的話,，你會(huì)發(fā)現(xiàn),，當(dāng)顯色劑中有濃硫酸時(shí)，加熱時(shí)間稍長就會(huì)變黑（其他顯色劑是沒事的）,，我老師說這是因?yàn)闈饬蛩岚?/span>CMC-Na炭化了,，其實(shí)[color=blue=這種情況你只要適當(dāng)降低CMC-Na的濃度就可以了，當(dāng)然如果不加CMC- Na的話容易把板弄破,。
22. 顯色劑R6：稱取100mgDC紅色19號（染料索引號No 45170）溶于150ml二乙mi,、70ml 95%乙醇和15ml水。此溶液可保存一周,。薄層板噴布顯色劑R6后,，立即在366nm下觀察和記錄。
問題與應(yīng)用：
23. 板子會(huì)裂口,，一則可能是因?yàn)楣枘z的比例太大,，二則可能是，板子要在常溫下晾干后,，再在烘箱中活化,。如果鋪完不久就在較高溫度下，裂口的幾率就比較高的,。
24. 板鋪好后,，自然涼干，一定是要從玻板后看也是干的,，注意一定要放平,，控制空氣流動(dòng);然后再放到烘箱中活化，這樣就不會(huì)有裂開的現(xiàn)象了; 如果直接鋪好后或者只是硅膠表面是干的,，放進(jìn)烘箱都會(huì)有裂開的,。
25. “晾干的板子放在烘箱里怎么全炸裂了，有什么方法可以避免板子炸裂,。”
你的板沒有*干透,，表面看是干了，但是zui中間的沒有干,，所以你直接放入105度的烘箱烘,，當(dāng)然會(huì)炸裂了，所以應(yīng)該先用低溫大約40度左右烘30分鐘左右,，再用105度活化,，就可以解決這個(gè)問題了,。
26. 板子炸裂也可能是CMC-Na中有絮狀沉淀所致。
27. 但凡加了CMC的板都易烘糊,，尤其是溫度高于100度時(shí),，若改用不加CMC輔的水板來作,，就不會(huì)有烘糊現(xiàn)象，但不加CMC輔的板又太軟,，點(diǎn)樣時(shí)容易點(diǎn)出洞,，有個(gè)好辦法是將CMC的濃度調(diào)至0.1%,，這樣就不易烘黑的,。
28. 系統(tǒng)適用性：如果你是做鑒別的話,，薄層的系統(tǒng)適用性主要是做檢測限和分離度。
如果你是做含量測定,，比如說用薄層掃瞄法,，應(yīng)該做線性范圍，同板精密度,，異板精密度，回收率,。
CMC-Na溶液的配制：
29. 藥典規(guī)定CMC-Na濃度為0.2%～0.5%,，實(shí)際操作中0.4%～0.5%zui為實(shí)用;CMC-Na溶液的溶劑應(yīng)用蒸餾水，以盡量減少污染,。
30. 配制CMC-Na溶液,，根據(jù)實(shí)際經(jīng)驗(yàn)一般將溶液濃度配成0.3%，需要鋪厚板可配成0.5%左右,，薄板可配成0.2%即可,。CMC-Na溶解是自然溶解（濃度不是太高），也可在水浴中加熱促溶（用時(shí)還是過濾一下好,，避免鋪出的板子有麻坑）,。
31. 配制CMC-Na溶液時(shí)，可以先量取好蒸餾水,，再將稱量好的CMC-Na均勻撒在水中,，用玻璃棒攪拌，如果操作的好的話可以不用加熱都能溶解的很好;當(dāng)溶解*后,，應(yīng)該抽濾一下,，這樣鋪的板子很均勻，不過濾會(huì)因?yàn)橐恍┤庋劭床坏降牟蝗芪锘烊?，這樣鋪的板子會(huì)出現(xiàn)許多小顆粒;
32. *個(gè)關(guān)鍵的地方,，你的CMC-Na溶液必須配制的好，放置的也要很好,，*分層之后只能取上清液,。上清液要澄清透明,，時(shí)間太長的CMC-Na可能會(huì)發(fā)黃，如果有霉菌出現(xiàn)的話,，不能使用;
33. 如果有抽濾裝置你可以直接把CMC-Na溶液濾過,，就可以不必等它沉淀再取上清液了（嘿嘿，我是急性子）,，還有兩個(gè)好處一是節(jié)省CMC-Na溶液,，二是倒濾過的CMC-Na溶液的時(shí)候不必?fù)?dān)心會(huì)把下層的不溶物倒出來了。
34. 在 CMC-Na的溶解過程中,，可以使用可進(jìn)行加熱操作的磁力攪拌器,，大概攪拌5小時(shí)，應(yīng)該可得到滿意的效果,。而且這樣就可以使CMC-Na溶解,，并且溶液更澄清; CMC-Na后處理，很多人說是過濾,，或者抽濾,，我覺得可能速度很慢，而且又容易浪費(fèi),。我的做法是離心,，5000rpm離心20min。倒出上清液,，（非常清,，也同時(shí)消除了過濾過程中可能發(fā)生的污染）。更難能可貴的是,，我可以收集下面沒有充分溶解的CMC-Na,。繼續(xù)加到水中，還可以配制,。
35. 配制4%～5%的羧甲基纖維素（CMC）：稱取CMC,，溶于冷水中，邊加熱邊攪拌,，直至成為清澈,、透明的溶液。
36. 有個(gè)辦法過濾CMC-Na溶液,，在布氏漏斗上平鋪薄薄一層脫脂棉,，千萬保證每個(gè)小孔都沒漏掉哦!用蒸餾水潤濕脫脂棉，啟動(dòng)真空泵,，抽緊后就可以放心大膽的倒CMC-Na溶液了,，保證濾過的溶液澄清透明，而且長時(shí)間放置不沉淀,。
37. CMC溶液的濃度0.3-0.7% 比較合適,，濃度高了將來顯色時(shí)如果有加熱過程稍不小心板子容易發(fā)黑,，濃度低了鋪出來的板子不結(jié)實(shí)，輕輕一碰就掉渣,，不好保存,，而且點(diǎn)樣時(shí)會(huì)很緊張，容易出洞;
38. 先將CMC-Na溶解*,可將溶解成所需濃度加熱后超聲處理,再抽濾,可很快得到上清液
39. CMC-Na煮沸大概30分鐘或更久的,，其實(shí)這個(gè)過程很慢,。千分之3。過濾一下,，抽濾,。要放冷。
40. 制備CMC-Na時(shí),，我的方法是將CMC-Na加入沸騰的水中,，慢加快攪，防止成團(tuán),，*溶解之后,，自然沉降或者是抽濾（建議不用濾紙，太慢了,，脫脂棉是個(gè)不錯(cuò)的選擇）,。
41. 對于CMC-Na溶液的配置，我認(rèn)為提前幾日配好,，放置再用,。配置時(shí)可用超聲分散,，對少量沒有立即溶解的,，放置后會(huì)逐漸消失。
42. CMC-Na要用蒸餾水為溶劑,，加熱溶解后,，放冷，濾過使用;消泡劑可直接與CMC-Na溶液混合使用;
43. 如是鋪CMC-Na的薄層板,，先將CMC-Na溶解*,，可將溶解成所需濃度加熱后超聲處理，再抽濾,，可很快得到上清液,。
44. 關(guān)于CMC-Na的配制我覺得還要說一點(diǎn)就是：
這個(gè)東西也算是一種高分子材料，而高分子材料的溶解必然都會(huì)有一個(gè)溶脹,，溶解的過程,，所以配制的時(shí)候，應(yīng)該將稱好的CMC-Na少量的撒在水的表面,，讓其自然沉降,，注意要散開平鋪,，這樣能夠充分浸潤，使其溶脹,，之后可以置于水浴鍋內(nèi)加熱溶解;當(dāng)然如果你不是很急著用的話也*可以,，直接用水泡著放那，估計(jì)十天半月的也可以用了,。
45. CMC-Na的溶解需要煮????藥檢所的老師用一個(gè)大缸子裝水,，按比例加入CMC-Na，讓他自然溶漲,、溶解,，臨用前用漏斗，加脫脂棉,，濾過即可;
46. 根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn),，薄層版變黑與CMC-Na的濃度過大有關(guān)，如果你留意的話,，你會(huì)發(fā)現(xiàn),，當(dāng)顯色劑中有濃硫酸時(shí)，加熱時(shí)間稍長就會(huì)變黑（其他顯色劑是沒事的）,，我老師說這是因?yàn)闈饬蛩岚?/span>CMC-Na炭化了,，其實(shí)[color=blue=這種情況你只要適當(dāng)降低CMC-Na的濃度就可以了，當(dāng)然如果不加CMC- Na的話容易把板弄破;
47. CMC-Na溶液煮了以后不能再用冷水兌,，否則,，幾天以后就會(huì)變綠，起霉,。
48. CMC-Na*溶解后,，用布氏漏斗過濾。
玻板：
49. 選擇合適的薄層板（如：20×10 cm）,，清潔干凈（先用洗手液或洗衣粉清洗,，再用自來水沖洗干凈，接著用蘸有乙醇的棉花擦拭干凈,，zui后把板吹干或烘干）,，放置于清潔處，備用,。
50. 玻璃板應(yīng)該很干凈,，沒有劃痕，沒有缺口,，4個(gè)角要“健全”,。
51. 載板要求平滑清潔。在使用前一定要處理干凈，用洗滌液或肥皂水洗滌,，再用水沖洗干凈,，烘干。
52. 清洗玻璃板相當(dāng)重要,，切記要清洗得相當(dāng)干凈,，不然會(huì)在鋪板中產(chǎn)生小氣孔。
53. 薄層板用洗潔精浸泡1～2小時(shí),，這樣比較容易清洗,，清洗后薄層板依柱豎起，半小時(shí)即可晾干,。
54. 板子一定要洗干凈,，用適中濃度的鹽酸浸泡是一個(gè)不錯(cuò)的選擇。
55. 板要干凈,。
總結(jié)：完整,、平滑、清潔!
研磨：
56. 硅膠和粘合劑的比例不用固定,，稀點(diǎn)鋪薄板,，稠點(diǎn)鋪厚板，以目的決定比例,。
57. 硅膠的研磨,，當(dāng)然是一個(gè)方向了，可以適量的加入一定量的無水乙醇或丙酮來消泡,，也可以適當(dāng)攪拌后放在干凈容器內(nèi)超聲,，效果都是不錯(cuò)的。手工鋪硅膠的用量一般 10×20 cm的約3～4克,，硅膠和CMC-Na的用量一般是1：2.8～3,，具體根據(jù)要鋪板子的厚度和CMC-Na的濃度決定。
58. 40%硅膠：按CMC溶液的量,、按40%的比例稱取薄板層析硅膠,，倒入大研缽中,，與CMC溶液混合,，充分研磨成均勻糊狀。
59. 先在研缽中加CMC溶液,，再加硅膠,，按同一方向研磨，這樣更容易調(diào)勻不易包埋硅膠顆粒;稠度以用研棒粘取,，成連珠狀不成線狀下滴為好;配制時(shí)遵循現(xiàn)配現(xiàn)用,、少量多次的原則，因其易干影響鋪制效果。
60. 硅膠和CMC-Na溶液的比例可以適當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié),，根據(jù)你所需要薄層板的軟硬來微調(diào),。可以一個(gè)人研磨,，一個(gè)人緩慢的倒CMC-Na溶液,。研磨時(shí)zui能考驗(yàn)?zāi)愕亩Γ矣X得你該找女生來磨,，但是那種太文弱的不行,。研磨時(shí)要順著一個(gè)方向，速度不宜快,，要順著研缽的邊緣,，觀察仔細(xì)，一定要把氣泡趕盡殺絕,。研磨好的因改是均勻的,，沒有氣泡，沒有固體的粉末類異物,，溶液有一定的粘性,。
61. 硅膠的濃度要適中。太稀鋪板時(shí)易淌出,，同時(shí)延長板的干燥時(shí)間;太稠,，流動(dòng)性不好，鋪板是靠其流動(dòng)性的,，同時(shí)也很可能在沒鋪好前凝固,。
62. 建議硅膠應(yīng)配制成偏稀的狀態(tài)，這樣鋪制更容易,，不必辛苦地顛好久,，而且可多可少，可薄可厚,。
63. 我的經(jīng)驗(yàn)是CMC-Na與硅膠配成 3：1比較合適,，CMC-Na用千分之三到千分之五，硅膠濃度稍大一些或小一些也行,，但不能太低,，否則板子邊緣會(huì)凹凸不平。
64. CMC-Na：硅膠為2.5：1較好,，樓上師兄說的3：1應(yīng)該也可以,，但是硅膠配的過稀時(shí)后果很嚴(yán)重，板子在晾干時(shí)會(huì)出現(xiàn)許多裂縫,，象萬壽菊樣的開花狀,，*不能用,。
65. 充分磨好硅膠，后,，再邊磨邊加CMC-Na溶液;鋪的時(shí)候,，如果慢且多，那么有時(shí)會(huì)干了,，你還要邊磨邊放點(diǎn)CMC-Na溶液,。
66. 研磨時(shí)防止氣泡可以加少量的乙醇或者丙酮;加入幾滴乙醇或丁醇，可起到消泡的作用,。
67. 加長研磨的時(shí)間,，勿太厚，避免板子炸裂,。
68. 超聲的排氣效果很好,。
69. 0.4% CMC-Na溶液（1：3）置研缽中，朝一個(gè)方向慢慢研細(xì)約10～15分鐘,，10g吸附劑加入3滴95%乙醇以驅(qū)趕氣泡;
70. 硅膠的研磨時(shí)間:如果嚴(yán)格規(guī)定的話,需在一分鐘內(nèi)完成,從加入CMC溶液到吸附劑中至涂布結(jié)束,應(yīng)在四分鐘內(nèi)完成
71. 硅膠與CMC-Na溶液的比例根據(jù)硅膠型號的不同而不同：硅膠G或硅膠GF254比例一般為1：2 ～ 1：3,，硅膠H或硅膠HF254比例一般為1：3 ～ 1：4。
72. 研磨的時(shí)候確實(shí)需要沿一個(gè)方向研,，不要敷衍
73. 硅膠研磨要充分,，防止氣泡。
74. 實(shí)在怕有氣泡,，可以超聲一下,。
鋪板：
75. 藥典：薄層板制備除另有規(guī)定外，將1份固定相和3份水（或加有黏合劑的水溶液）在研缽中向一方向研磨混合,，去除表面的氣泡后,，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.2～0.3 mm）,，取下涂好薄層的玻板,，置水平臺上于室溫下晾干，后在110℃烘30分鐘,，即置有干燥劑的干燥箱中備用,。使用前檢查其均勻度（可通過透射光和反射光檢視）。表面應(yīng)均勻,，平整,，無麻點(diǎn)、無氣泡,、無破損及污染,。
76. 薄層板的厚度：如果定性分析,，一般厚度以0.25 mm為好;如果要分離制備少量的純物質(zhì)時(shí),，厚度應(yīng)稍大一些，常用的為0.5 mm-0.75 mm，甚至有1 mm-2 mm的,。
77. 鋪板,，我覺得是各人各喜歡，可以順著板中間倒,，也可以順著某個(gè)邊緣倒,，倒時(shí)也要注意不能引入小氣泡?？梢杂貌ＡО粢芤浩戒佋诓ＡО迳?，如有需要，可以雙手10個(gè)指頭拖住玻璃板,，有節(jié)奏的顛,，使得硅膠分?jǐn)倓蚍Q。尤其是4個(gè)角,，容易高出玻璃板其他部位,，所以要格外注意。顛好的板,，表面看上去要光滑平整,，沒有氣孔。
78. 將薄層用硅膠粉稱定加入3倍量的CMC-Na溶液,，研磨均勻（勻速一個(gè)方向）成糊狀（我用1分鐘左右）,，不要靜置迅速將涂料倒于備好的玻璃板（事先清洗干凈，不可有污漬,、水滴,。）自上而下自然流注鋪于玻璃板，倒量為距離邊緣3厘米左右即可（鋪厚板用量適當(dāng)多些,，薄板量少些）,，然后用研缽棒涂布玻璃板上。顛板（上下左右或傾斜根據(jù)板的涂布情況而定）,。鋪好的板要選擇一個(gè)水平,、通風(fēng)的平臺放置，不可落上灰塵,。
79. 依據(jù)薄層板使用需要,，將適量研好的吸附劑倒到薄層板上，先用小錘將吸附劑蕩勻,，傾斜層析板,，使吸附劑流至層析板一側(cè)，待吸附劑蓄積一定量后,，再反向傾斜層析板,，使吸附劑回流;然后是另外兩個(gè)方向,，重復(fù)上述操作，后輕顛幾下薄層板即可,。
80. 將吸附劑制備好后,，直接將適量傾倒于玻板的中央處，接著用研棒輕輕將吸附劑溶液向四周攤勻,，然后開始顛玻板;顛的時(shí)候可要注意啦：一定要輕輕的顛,，從玻板的一頭顛到另一頭，然后反過來進(jìn)行,。重復(fù)幾次即可,。
81. 將研好的糊糊倒在干凈的板上，我一般是從中間一次性倒下去,，然后用左手托板,，輕輕傾斜，使糊糊向板邊緣流動(dòng),，右手拿研棒將沒鋪到的地方涂均勻,，但要注意研棒在接觸糊糊一直到zui后涂抹均勻才能離開板，一旦提起就不能再去涂抹,，否則會(huì)留下痕跡,。涂抹結(jié)束后，就顛板啦,，我的經(jīng)驗(yàn)是顛的幅度不易大,，但頻率可以快些。
82. 顛板,。此過程要與前面步驟連續(xù)進(jìn)行,，且不宜久顛，以保證顛好后硅膠還有一定的流動(dòng)性,，放置到平臺時(shí)仍可以靠自身流動(dòng)修正顛板及移動(dòng)所產(chǎn)生的不均,。
83. 將載玻片置于平臺上，用藥匙舀取糊狀硅膠,，均勻地鋪在載玻片表面,。
84. 鋪板時(shí)，用的硅膠量要掌握好,。
85. 將硅膠倒入在盛有CMC-Na溶液的研缽中,，CMC-Na溶液的濃度不宜過高，研磨均勻,，大約5-10分鐘,，用研棒粘取，成珠滴為好,，鋪板,，兩面顛簸至平放置平臺上,。
86. 載玻片的涂布：將干燥后的載玻片兩片夾在一起，沉浸入糊狀物中,，使在載玻片上形成固體層.為了浸蕉一對載玻片,，用你的指間夾住載玻片的一端,，并盡可能地向下進(jìn)入所提供的糊狀物中.當(dāng)載波片一浸入糊狀物中后,，立即以快而平穩(wěn)的速度將其拉出，并讓過量的糊狀物滴回.小心的分開載玻片,，放到水平臺上,，干燥.（注意：糊狀物一定要均勻;要迅速拉出載玻片，大多數(shù)人拉得太慢）
87. 研磨硅膠時(shí),，我一般取30 g硅膠H,，加入5%的CMC-Na 100 ml，研磨,，當(dāng)將研棒提起時(shí),，硅膠象成溜似的滴下為正好。
88. 鋪完板后,，將兩邊的邊緣修理一下,，并且各個(gè)邊緣都要擦干凈，這樣可以避免跑歪,。
89. 邊緣壞一點(diǎn)可以用刀子刮去整齊的一條,。
晾干：
90. 對鋪好的板要選擇平整的地方，自然干燥,，不易人為強(qiáng)制干燥,。干燥后再活化，否則板會(huì)開裂,。
91. 鋪好的板,，要找個(gè)干凈的地方放置晾干，這個(gè)過程也是耐心的等著它,，請勿打擾,。
92. 板鋪好后，自然涼干,，一定是要從玻板后看也是干的,，注意一定要放平，控制空氣流動(dòng),。
93. 板子鋪好之后一定要放在平面上陰干（一定是陰干,，不然你會(huì)后悔的），如果看熒光是找一個(gè)比較干凈的房間,，不然熒光下板子上會(huì)有很多點(diǎn)點(diǎn),。
94. 要等陰干且透后才能放入烘箱干燥活化時(shí),。還有一點(diǎn)，鋪板和涼板時(shí)周圍的環(huán)境要好,，桌面要干凈,，zui怕是有粉塵，如有粉塵落在未干的板上可就慘了,，定量不行,，可以定性，但不好看,。
95. 自然干燥后,，放入烘干箱烘12小時(shí)以上。
96. 薄層板鋪好后一定要放置在平的臺面上,，否則難保證板面硅膠的厚度均勻,。
97. 鋪制好的薄層板先讓其稍干后，即看不出有明顯的水印,，放入烘箱內(nèi)用50度以下的溫度并開鼓風(fēng)干燥30分鐘,，再升溫干燥至干，注意升溫過快在使用的過程中有可能發(fā)生起層的現(xiàn)象,，不利于分離,，以上方法經(jīng)本人兩年多的實(shí)踐，效果較好且耗時(shí)又不太長,。
98. 置平整處過夜自然晾干;如使用較急亦可60℃烘干,。
活化：
99. 活化的目的是除去水分。
100. 自然晾干后,，活化一下（105攝氏度40分鐘左右）,，置于密封的干燥器保存。
101. 再在105~110℃活化,，活化時(shí)間為0.5~1小時(shí),，冷卻后即可使用。
102. 厚板在活化時(shí)容易裂,，考慮到化學(xué)藥相對容易分離,，所以降低活化溫度，自然晾干后,，40或60攝氏度的烘箱中2～3小時(shí)即可,，干燥器中保存。
103. 用于分離中藥的薄板需要活化,，活化后要立即使用,，可以稱熱點(diǎn)樣飽和，不然空氣中的水分會(huì)導(dǎo)致你作無用功，使得吸附色譜轉(zhuǎn)為分配色譜,。
104. 薄層烘干的時(shí)候不要在帶鼓風(fēng)的烘箱中烘,，容易起皺，或者破裂,。
點(diǎn)樣：
105. 藥典：點(diǎn)樣器一般采用微升毛細(xì)管或手動(dòng),、半自動(dòng)、全自動(dòng)點(diǎn)樣器材,。
106. 藥典：除另有規(guī)定外,，在潔凈干燥的環(huán)境中，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上,，一般為圓點(diǎn)狀或窄細(xì)的條帶狀,，點(diǎn)樣基線距的底邊15～20 mm,，板一般基線距底邊 8～10 mm,，圓點(diǎn)狀直徑一般不大于3 mm，板一般不大于2 mm;條帶狀寬度一般為5～10 mm,。板條帶寬度一般為4～8 mm,，可用半自動(dòng)或自動(dòng)點(diǎn)樣器械噴霧法點(diǎn)樣。點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜,。一般不少于8 mm,，板供試品間隔不少于5 mm。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層板表面,。
107. 點(diǎn)樣,，可以用進(jìn)樣器，也可以用定量毛細(xì)管（有點(diǎn)貴啊,，5ul的2塊多一根）,，點(diǎn)樣時(shí)盡量使點(diǎn)小且圓整，盡量不要破壞板子,。
108. 毛細(xì)管點(diǎn)樣,，點(diǎn)樣量不能控制。你可以到藥店買1～2ml的注射器作為點(diǎn)樣器,，可以滿足TLC鑒別的要求,，而且很便宜哦!
109. 點(diǎn)樣，我上學(xué)的時(shí)候,，老師用比較便宜的進(jìn)樣器（大約10幾塊錢吧,，10μl即可），將針尖打磨圓滑,，老師好像是用銼一點(diǎn)一點(diǎn)銼的,，這樣點(diǎn)樣的時(shí)候樣品溶液不容易沿針尖上行（甲醇溶液都這樣），并且針尖不會(huì)刺破已經(jīng)鋪好的薄層板?，F(xiàn)在,，我和師兄都是實(shí)行的這個(gè)辦法,，還是比較實(shí)用的，點(diǎn)樣量可以到 0.5?l,。當(dāng)然,，點(diǎn)樣的時(shí)候手不能抖動(dòng)，動(dòng)作要輕
110. 要磨平微量進(jìn)樣器的針尖,，簡單的方法就是,，在展缸的蓋子上輕磨（當(dāng)然是靠近中間部分），就很快能解決問題,，且很平滑,。
111. 關(guān)于點(diǎn)樣：我們一直都用液相平頭進(jìn)樣針，10 ul就夠了,，如果點(diǎn)樣量低于1ul的話,，就用氣相進(jìn)樣針。都可以很好的控制點(diǎn)樣量,，且斑點(diǎn)也可以滿足要求,。速度也快?？梢员苊饷?xì)管先快后慢的毛病,。
112. 用定容毛細(xì)點(diǎn)樣管：5 ul ，2 ul,，1 ul,。
113. 對于點(diǎn)樣我也有些心得。原來有專門的點(diǎn)樣管,，是10 ul規(guī)格的,，是點(diǎn)10 ul的好說，反正點(diǎn)完就是了,，但要點(diǎn)5ul或更少,，那就全憑眼力了，做得是一點(diǎn)把握沒有啊,，但還得點(diǎn),，呵呵。自從發(fā)現(xiàn)可以用微量進(jìn)樣器后,，不僅可以控制的得心應(yīng)手,，不會(huì)因?yàn)橐话床环€(wěn)把藥液給全點(diǎn)上去導(dǎo)致斑點(diǎn)過大，還可以重復(fù)利用節(jié)省開支,，重要的是還環(huán)保,。呵呵!提倡廣大的兄弟姐妹也用微量進(jìn)樣器替代塑料的點(diǎn)樣管，經(jīng)濟(jì)又好用。
平衡與飽和：
114. 藥典：展開前如需要溶劑蒸氣預(yù)預(yù)平衡,，可在展開缸中加入適量的展開劑,，密閉，一般保持15～30分鐘,，溶劑蒸氣預(yù)平衡后,，應(yīng)迅速放入載有供試品的薄層板，立即密閉,，展開,。如需使展開缸達(dá)到溶劑蒸氣飽和的狀態(tài)，則須在展開缸的內(nèi)側(cè)壁上貼二條與缸一樣高,、寬的濾紙條,，一端浸入展開劑中，密封頂蓋,，使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作,。
115. 飽和也非常重要，邊緣效應(yīng)很嚴(yán)重的不妨用下端浸在展開劑中的濾紙貼在展開缸的內(nèi)壁,，這樣飽和效果會(huì)好一些,。
116. 在層析缸口涂適量凡士林,，增加密封性,。
117. 層析缸在展開前平衡一個(gè)小時(shí)左右，讓里面的展開劑平衡,。也可以在兩邊放濾紙條,，增加展開劑的散發(fā)面積，減少邊緣效應(yīng),。
118. 以展開劑邊緣效應(yīng)的大小,，確定展開劑平衡時(shí)間的長短，一般平衡時(shí)間在30分鐘即可,。