QQ交談
您所在位置：產品搜索
請輸入產品關鍵字：
聯(lián)系方式
地址：上海市寶山區(qū)錦樂路
郵編：200431
聯(lián)系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機：13122441390 15900755943
留言：發(fā)送留言
個性化：www.shifengsj.com
網(wǎng)址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://sorrent.com.cn/st236594/
郵編：200431
聯(lián)系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機：13122441390 15900755943
留言：發(fā)送留言
個性化：www.shifengsj.com
網(wǎng)址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://sorrent.com.cn/st236594/
技術文章
兔轉化生長因子β2（TGFβ2）酶聯(lián)免疫分析elisa試劑盒使用說明書
點擊次數(shù)：1210 發(fā)布時間：2012-10-20
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用
預期應用
ELISA法定量測定兔血清,、血漿、細胞培養(yǎng)物上清或其它相關液體中轉化生長因子β2（TGFβ2）含量,。
上海逸峰生物科技有限公司長期經營Elisa試劑盒,、實驗耗材、抗體,、細胞等生物化學試劑。還代理不同品牌價格檔次的ELISA試劑盒,。價格實惠,，質量有保證,信譽*。敬請咨詢! ： ：
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中TGFβ2水平,。用純化的抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被抗體的微孔中依次加入TGFβ2抗原,、生物素化的抗兔TGFβ2抗體,、HRP標記的親和素，經過*洗滌后用底物TMB顯色,。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的TGFβ2呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，計算樣品濃度。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板：一塊（96孔）
2. 標準品（凍干品）：2瓶,，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解,，其濃度為2,000 pg/mL,，做系列倍比稀釋后，分別稀釋成1,000 pg/mL,，500 pg/mL ,，250 pg/mL，125 pg/mL,，62.5 pg/mL,，31.2 pg/mL,，15.6 pg/mL，其原液直接作為zui高標準濃度,，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/mL,，臨用前15分鐘內配制。
如配制1,000 pg/mL標準品：取0.5ml 2,000 pg/mL的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,，混勻即可,，其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液：1×20ml/瓶,。
4. 檢測稀釋液A：1×10ml/瓶,。
5. 檢測稀釋液B：1×10ml/瓶。
6. 檢測溶液A：1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測稀釋液A 1：100稀釋,，稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100ul）,，實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制,，輕輕混勻,，在使用前一小時內配制。
7. 檢測溶液B：1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測稀釋液B1：100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶,。
9. 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍,。
10. 終止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
標本的采集及保存
1．細胞培養(yǎng)物上清：請離心后收集上清,，并將標本保存于-20℃,，且應避免反復凍融。
2．血清：標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融,。
3．血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融,。
注：標本溶血會影響zui后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測,。
操作步驟
實驗開始前,，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r，均需混勻,，混勻時盡量避免起泡,。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,，用樣品稀釋液進行稀釋,，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣：分別設空白孔,、標準孔,、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00ul,，余孔分別加標準品或待測樣品100ul，注意不要有氣泡,，加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,，酶標板加上蓋或覆膜,，37℃反應120分鐘。
為保證實驗結果有效性,，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體,，甩干,，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100ul（取1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制,，輕輕混勻,，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘,。
3. 溫育60分鐘后,，棄去孔內液體，甩干,，洗板3次,，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔,，甩干,。
4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100ul，37℃,，60分鐘,。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干,，洗板5次,，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔,，甩干,。
6. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色（30分鐘內,，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）,。
7. 依序每孔加終止溶液50ul,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實驗結果的準確性,，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）,。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測,。
注：
1． 每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑,，只是zui后加底物溶液及2NH2SO4,。測量時先用此孔調OD值至零。
2．為防止樣品蒸發(fā),，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,，酶標板加上蓋或覆膜。
3. 未使用完的酶標板或者試劑,，請于2-8℃保存,。標準品、檢測溶液A工作液,、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,。請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液,。
4. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,，以保證檢測結果的準確性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸0.4ml注入孔內,，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要,，重復此過程數(shù)次,。水紙,，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少
自動洗板：如果有自動洗板機,，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中,。
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸0.4ml注入孔內,，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要,，重復此過程數(shù)次,。水紙,，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少
自動洗板：如果有自動洗板機,，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中,。
特異性
本試劑盒可同時檢測重組或天然的兔TGFβ2，且與其它相關蛋白無交叉反應,。
計算
以標準物的濃度為橫坐標（對數(shù)坐標）,，OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1． 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性,。
2． 一次加樣時間控制在5分鐘內,，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
3． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔。
4． 如標本中待測物質含量過高,，請先稀釋后再測定,，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。
5．在配制標準品,、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制,，不能混淆,。
6．底物請避光保存。
檢測范圍：
15.6 pg/mL -2,000 pg/mL
說明
1．試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時）,；2-8℃（頻繁使用時）,。
2．有效期：6個月
3．濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,。
4．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質,，此為正常現(xiàn)象,，不會對實驗結果造成任何影響,。
5．中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準,。