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人白細胞介素16（IL-16）酶聯(lián)免疫分析（ELISA） 試劑盒使用說明書
點擊次數(shù)：1453 發(fā)布時間：2012-9-28
人白細胞介素16（IL-16）酶聯(lián)免疫分析（ELISA） 試劑盒使用說明書 本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定人血清,，細胞上清及相關液體樣本中白細胞介素16（IL-16）的含量。 實驗原理： 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白細胞介素-16（IL-16）水平,。用純化的人白細胞介素-16（IL-16）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素-16,，再與HRP標記的羊抗人抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素-16（IL-16）呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中人白細胞介素-16（IL-16）含量。 試劑盒組成： 試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存 說明書 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1個 1個 酶標包被板 1×48 1×96 2 標準品：135ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2 酶標試劑 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2 樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2 顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2 顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2 終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2 濃縮洗滌液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2 樣本處理及要求： 1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應再次離心,。 2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應該再次離心,。 3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行。 4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,。檢測細胞內(nèi)的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。 5. 組織標本：切割標本后,，稱取重量。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?/span>2 6. 標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于 7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。 操作步驟 1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔,，在*、第二孔中分別加標準品100μl,，然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后從*孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五,、第六孔中，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為90 ng/L，60 ng/L，30 ng/L,，15 ng/L,，7.5 ng/L）。 2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。 3. 溫育：用封板膜封板后置 4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用,。 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。 7. 溫育：操作同3。 8. 洗滌：操作同5,。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,， 10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。 11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。 注意事項： 1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。 2． 濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果。 3． 各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。 4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。 5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。 6． 底物請避光保存,。 7． 嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準. 8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。 9． 本試劑不同批號組分不得混用,。 10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。 以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標， 在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋 倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值 代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋 倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。 （此圖僅供參考） 試劑盒性能： 1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.95以上。 2.批內(nèi)與批見應分別小于9%和11% 檢測范圍： 5 ng/L -100 ng/L 保存條件及有效期： 1.試劑盒保存：,；2 2．有效期：6個月
計算：