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大鼠CD3分子（CD3）酶聯(lián)免疫分析（ELISA） 試劑盒使用說明書
點(diǎn)擊次數(shù)：1269 發(fā)布時(shí)間：2012-9-27
大鼠CD3分子（CD3）酶聯(lián)免疫分析（ELISA） 試劑盒使用說明書 本試劑盒僅供研究使用。 藥品名稱： 通用名：大鼠CD3分子（CD3）酶聯(lián)免疫分析試劑盒 使用目的： 本試劑盒用于測定大鼠血清,，血漿及相關(guān)液體樣本中CD3分子（CD3）含量,。 實(shí)驗(yàn)原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠CD3分子（CD3）水平。用純化的大鼠CD3分子（CD3）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入CD3分子（CD3）,，再與HRP標(biāo)記的CD25抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的CD3分子（CD3）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠CD3分子（CD3）濃度,。 試劑盒組成 1 20倍濃縮洗滌液 30ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（13.5U/ml） 0.5ml×1瓶 3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份 5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個(gè) 標(biāo)本要求 1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于 2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟 1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,，在*,、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在*,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻；然后從*孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,，混勻,；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中,，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為9U/ml,，6U/ml ,，3U/ml，1.5U/ml,，0.75U/ml）,。 2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。 3. 溫育：用封板膜封板后置 4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。 7. 溫育：操作同3。 8. 洗滌：操作同5,。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,， 10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。 計(jì)算 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度。 注意事項(xiàng) 1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。 3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。 4． 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計(jì)算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。 6．底物請避光保存。 7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 9．本試劑不同批號組分不得混用,。 10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準(zhǔn)。 檢測范圍： 0.1U/ml -12U/ml 規(guī)格： 96人份/盒 保存條件及有效期 1．試劑盒保存：,；2 2．有效期：6個(gè)月