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小鼠免疫球蛋白E（IgE）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）
點(diǎn)擊次數(shù)：1277 發(fā)布時(shí)間：2012-7-15
小鼠免疫球蛋白E（IgE）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
藥品名稱：
通用名：小鼠免疫球蛋白E（IgE）酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于測定小鼠血清,、血漿、或其它組織液中免疫球蛋白E（IgE）含量,。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠免疫球蛋白E（IgE）水平,。用純化的IgE 抗
體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入小鼠免疫球蛋白E（IgE），再
與HRP 標(biāo)記的羊抗小鼠抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底
物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。
顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白E 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD
值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠免疫球蛋白E（IgE）濃度,。
試劑盒組成
1 25 倍濃縮洗滌液30ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑6ml×1 瓶8 標(biāo)準(zhǔn)品（540 μg/ml） 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板12 孔×8 條9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個(gè)
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
2．待檢血清1：200 稀釋：具體為在試管中先按1：20 稀釋待檢血清（190μl 樣品稀釋
液中加10μl 待檢血清,，混勻）,，再按1：10 稀釋待檢血清（取10μl1：20 稀釋的
待檢血清加90μl 的樣品稀釋液，混勻即可）
3．不能檢測含NaN3 的樣品,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
4．可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10 孔,，在*、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品100μl,，然后在*,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻,；然后從*孔,、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，
混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉，再各取50μl 分別加到第五,、第六孔
中,，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,，混勻,；混勻后從第五、第六孔中各
取50μl 分別加到第七,、第八孔中,，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混
勻后從第七,、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，
濃度分別為（360 μg/ml,，240μg/ml ，120μg/ml,，60μg/ml,， 30μg/ml）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、待測樣
品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣
品zui終稀釋度為5 倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混
勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒后棄去,，如此
重復(fù)5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD 值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，
即為樣品的實(shí)際濃度,。
注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間
控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
4． 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計(jì)
算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×1000）。
5． 嚴(yán)格按說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
6．底物請避光保存,。
7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準(zhǔn)。
檢測范圍：
20μg/ml-400μg/ml
規(guī)格：
96 人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6 個(gè)月