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吉姆薩染色的原理
點(diǎn)擊次數(shù)：4125 發(fā)布時(shí)間：2017-9-20
吉姆薩（Giemsa）染色法 ：吉姆薩染液由天青,，伊紅組成,。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同。
嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì),，與酸性染料伊紅結(jié)果,，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì),；細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞 胞漿為酸性,，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染紫藍(lán)色,，稱為嗜堿性物質(zhì),；中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染淡紫色,，稱為中性物質(zhì),。
PH對(duì)細(xì)胞染色有影響。細(xì)胞各種成分均不蛋白質(zhì),，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì),，所帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環(huán)境中下在電荷增多,，易與伊紅結(jié)合,，染色偏紅；在偏三性環(huán)境中負(fù)電荷增多,，易與美藍(lán)或天青結(jié)合,，染色 偏藍(lán)。因此細(xì)胞染色對(duì)氫離子濃度十分敏感,，染色用正經(jīng)片必須清潔,，無酸堿污染。配制頊特液必須用甲醇,，稀釋染色必須用緩沖液,，沖洗用水應(yīng)近中性，否則可導(dǎo)致各種細(xì)胞染色反應(yīng)異常,，以致識(shí)別困難,，甚至造成錯(cuò)誤,。
一般性操作技術(shù)血涂片制備；細(xì)胞染色,；顯微檢查,；血液病診斷；染色不良,；瑞特（Wright）染色法,；酸性染料；伊紅,；堿性染料,；亞甲藍(lán)；吸附作用,；PH對(duì)細(xì)胞染色的影響,；甲醇；吉姆（Giemsa）染色法春天要常用潤(rùn)膚劑,，它含有松香油脂酸和豐富維生素a,，常用可加快皮膚血液循環(huán)，剌激面部細(xì)胞分泌,，有效改善皮膚生理環(huán)境,，減少氣候?qū)ζつw的危害。
第二節(jié) 血涂片的制備和細(xì)胞染色
血涂片的顯微檢查是血液細(xì)胞學(xué)檢查的基本方法,，臨床上應(yīng)用極為廣泛,，特別是對(duì)于各種血液病的診斷具有重要的價(jià)值，近年來血細(xì)胞分析儀的廣泛應(yīng)用,，血涂片的觀察也可作為判斷儀器結(jié)果的簡(jiǎn)易方法,。比臺(tái)觀察10個(gè)高倍視野血涂片中白細(xì)胞和血小板數(shù)大致估計(jì)血內(nèi)這些細(xì)胞的數(shù)量，借以作為儀器結(jié)果分析后質(zhì)控的參考,。
但積壓涂片制備和染色不良,，常使細(xì)胞鑒別發(fā)生困難，甚至導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)論,。例如,，血膜過厚細(xì)胞重疊縮小，血膜太薄白細(xì)胞多集中于邊緣,，細(xì)胞分布不勻,；染色偏酸或偏堿均可使細(xì)胞染色反應(yīng)異常。因皮制備厚薄適宜,，分布均勻,，染色良好的血涂片是血液學(xué)檢查的重要革本技術(shù)之一。
血涂片制備方法及注意事項(xiàng)將在實(shí)習(xí)指導(dǎo)中詳細(xì)介紹。
1．瑞特（Wright）染色法 ：為發(fā)觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu),，識(shí)別各種細(xì)胞及其異常變化，血涂片必須嘲行染色,。血涂片的各種染色方法大多是羅氏染色法衍變來的,。目前常用瑞特染色法。
（1）瑞特染料是由酸性染料伊紅和堿性染料亞甲藍(lán)組成有復(fù)合染料,。亞甲藍(lán)為四甲基硫堇染料,，有對(duì)醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)。通常為氯鹽,，即氯化美藍(lán),。美藍(lán)容易氧化為一、二,、*基硫堇等次級(jí)染料,。市售美藍(lán)中部分已被氧化為天青。伊紅通常為鈉鹽,。即伊紅和伊混合后,，產(chǎn)生一種憎液性膠體伊紅美藍(lán)中性沉淀，即瑞特染料,。
（2）細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用,，又有化學(xué)的親和作用，各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同,，對(duì)各種染料的親和力也不一樣,。因此，用本染料液染色后,，在同一血片上,，可以看到各種不同的色彩，例如血紅蛋白,，嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì),，與酸性染料伊紅結(jié)果，染粉紅色,，稱為嗜酸性物質(zhì),；細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞 胞漿為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合,，染紫藍(lán)色,，稱為嗜堿性物質(zhì)；中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合,，染淡紫色,，稱為中性物質(zhì)。
（3）PH對(duì)細(xì)胞染色有影響,。細(xì)胞各種成分均不蛋白質(zhì),，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì),，所帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環(huán)境中下在電荷增多,，易與伊紅結(jié)合,，染色偏紅；在偏三性環(huán)境中負(fù)電荷增多,，易與美藍(lán)或天青結(jié)合,，染色 偏藍(lán)。因此細(xì)胞染色對(duì)氫離子濃度十分敏感,，染色用正經(jīng)片必須清潔,，無酸堿污染。配制頊特液必須用甲醇,，稀釋染色必須用緩沖液,，沖洗用水應(yīng)近中性，否則可導(dǎo)致各種細(xì)胞染色反應(yīng)異常,，以致識(shí)別困難,，甚至造成錯(cuò)誤。
新鮮配制的染料偏堿,，須在室溫或是37℃下貯存一定時(shí)間,，待染料成熟，主要是美藍(lán)逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)樘烨郆后才能使用,，貯存時(shí)愈久,，染色效果愈好。EAM GILLILAND等采用吸光度比值作為頊特染液的質(zhì)量規(guī)格,。rA測(cè)定方法如下：取瑞特染液15-25μl（視染液濃度而定）,，加甲醇10ml稀釋，混勻后以甲醇為空折管,，分別以波長(zhǎng)650nm和25nm比色,。Ra=a650/a525.因?yàn)槊浪{(lán)吸收峰小組長(zhǎng)為650nm，伊紅吸收峰波長(zhǎng)為525nm ;天青B吸收峰也為650nm但吸光度A約為美藍(lán)的一半,。所以新配染料rA接近2,，隨著美藍(lán)逐漸氧化為天青B，RA也相應(yīng)下降,。RA下降到1.3±0.1時(shí)即可使用,。瑞特染液貯存過程中，必須塞嚴(yán),，以防止甲醇揮發(fā)和被氧化成甲酸,。有人主張?jiān)谂浞街屑尤敫视?0ml，防止甲醇揮發(fā)，關(guān)可合細(xì)胞染色清晰,。甲醇必須純凈,，如甲醇中丙酮含量過多，染色偏酸,，使白細(xì)胞著色不良,。
2．吉姆薩（Giemsa）染色法 ：吉姆薩染液由天青，伊紅組成,。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同。但本法對(duì)細(xì)胞核和寄生蟲著色較好,，結(jié)構(gòu)顯示更不清晰,，而胞質(zhì)和中性顆粒則著色較差。為兼顧二者之長(zhǎng),，可用復(fù)合染色法,。即以稀釋吉姆薩液代替緩沖液，按瑞特染色法染10min,?；蛳扔萌鹛厝旧ㄈ旧螅儆孟♂尲匪_復(fù)染,。