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技術(shù)文章
幾種轉(zhuǎn)染方法對(duì)比
點(diǎn)擊次數(shù)：2046 發(fā)布時(shí)間：2017-4-10
| 轉(zhuǎn)染方法 | 原理 | 主要應(yīng)用 | 特點(diǎn) | 廠(chǎng)家及產(chǎn)品 | |
| DEAE－葡聚糖法 | 帶正電的DEAE-葡聚糖與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞 | 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 | 相對(duì)簡(jiǎn)便,、重復(fù)比磷酸鈣好,但對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用,轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清且一般只用于BSC-1,CV-1,COS細(xì)胞系 | sigma-aldrich(DEAE-Dextran Transfection Kit) | |
| 磷酸鈣法 | 磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞 | 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,染瞬轉(zhuǎn)染 | 不適用于原代細(xì)胞（所需的DNA濃度較高）,操作簡(jiǎn)便但重復(fù)性差,有些細(xì)胞不適用 細(xì)胞建議用CSCL梯度離心,，轉(zhuǎn)染是拷貝數(shù)較多 | GIBCO BRL ，Promega | |
| 陽(yáng)離子脂質(zhì)體法 | 帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物,，然后脂質(zhì)體上剩余的電核與細(xì)胞膜上的唾液酸殘基的負(fù)電核結(jié)合,；另一種解釋是通過(guò)細(xì)胞是內(nèi)吞作用而被進(jìn)入細(xì)胞。(若DNA濃度過(guò)高,，中和脂質(zhì)體表面電核,，而降低了與細(xì)胞的結(jié)合能力) | 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,所有細(xì)胞 | 使用方法簡(jiǎn)單，可攜帶大片段DNA,，通用于各種類(lèi)型的裸露DNA或RNA,，能轉(zhuǎn)染各種類(lèi)型的細(xì)胞，沒(méi)有免疫原性,。雖在體外基因轉(zhuǎn)染中有很高的效率,，但在體內(nèi)，能被血清清除,，并在肺組織內(nèi)累積,，誘發(fā)強(qiáng)烈的抗炎反應(yīng)，導(dǎo)致高水平的毒性,，這在很大程度上限制了其應(yīng)用 | Invitrogen（Lipofectamine 2000,，Lipofectamine，Lipofectin,，Lipofectamine Plus,，Cellfectin） Roche（Dosper，DOTAP,，F(xiàn)uGENE 6） CPG Biotech Co（GeneLimo Plus,，GeneLimo Super） Promega（Transfast,，Tfx，Transfectam） | |
| 陽(yáng)離子聚合物 | 帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,，并通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞,。 | 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,所有細(xì)胞 | 除了具有陽(yáng)離子脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率高，操作簡(jiǎn)單,，適用范圍廣,，重復(fù)性好等特點(diǎn)外，還具有在體內(nèi),，轉(zhuǎn)染效率高,，細(xì)胞毒性低等特點(diǎn)，是新一代的轉(zhuǎn)染試劑,。 | Sunma(梭華－Sofast®) Qbiogene（jetPEI™） Qiagen(SuperFect,，Polyfect） | |
| 病毒介導(dǎo)法 | 逆轉(zhuǎn)錄病毒(RNA) | 通過(guò)病毒中膜糖蛋白和宿主細(xì)胞表面的受體相互作用而進(jìn)入宿主細(xì)胞，之后反轉(zhuǎn)入酶啟動(dòng)合成DNA并隨機(jī)整合到宿主基因組中 | 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,特定宿主細(xì)胞 | 可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,、原代細(xì)胞,，體內(nèi)細(xì)胞等,但攜帶基因不能太大（<8kb）,細(xì)胞需處分裂期,需考慮安全因素 | 中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì) |
| 腺病毒(雙鏈DNA) | 先和細(xì)胞表面的受體結(jié)合，繼而在αv整合素介導(dǎo)下被細(xì)胞內(nèi)吞 | 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,特定宿主細(xì)胞 | 可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,需考慮安全因素 | 中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì) | |
| Biolistic 顆粒傳遞法 （基因槍粒子轟擊法） | 將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀,，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細(xì)胞,，DNA在胞內(nèi)逐步釋放，表達(dá) | 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染,，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 | 可用于：人的表皮細(xì)胞,，纖維原細(xì)胞，淋巴細(xì)胞系以及原代細(xì)胞 | . | |
| 顯微注射法 | 用顯微操作將DNA直接注入靶細(xì)胞核 | 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 | 轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限,多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的胚胎細(xì)胞 | . | |
| 電穿孔法 | 高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位,，DNA通過(guò)膜上形成的小孔導(dǎo)入 | 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,所有細(xì)胞 | 適用性廣,，除了質(zhì)粒外，還可轉(zhuǎn)染大的基因組（>65kb）但細(xì)胞致死率高,，DNA和細(xì)胞用量大,， 需根據(jù)不同細(xì)胞類(lèi)型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件，拷貝數(shù)較少1-20 | . | |