會(huì)員.png)
QQ交談
您所在位置：請(qǐng)輸入產(chǎn)品關(guān)鍵字：
郵編：200431
聯(lián)系人：王小姐
電話：021-56640936
傳真：021-33250231
手機(jī)：13122441390 15900755943
留言：發(fā)送留言
個(gè)性化：www.shifengsj.com
網(wǎng)址：www.shfeng-edu.com
商鋪：http://sorrent.com.cn/st236594/
植物多倍體鑒定技術(shù)
點(diǎn)擊次數(shù)：1710 發(fā)布時(shí)間：2017-3-20
多倍體廣泛分布于植物界，如普通小麥?zhǔn)钱愒戳扼w,，棉花是四倍體,，栽培草莓是八倍體等，多倍體產(chǎn)生途徑除自然發(fā)生外,，化學(xué)藥劑誘導(dǎo)是很有效的途徑,。不管以何種方式產(chǎn)生，檢測(cè),、鑒定多倍體就顯得很重要和迫切,。
鑒定多倍體，可采用間接和直接的方法,。間接方法包括形態(tài)學(xué)和細(xì)胞學(xué)的觀察,，直接法是直接對(duì)試材檢測(cè)染色體的數(shù)目。一般來講，多倍體植物在形態(tài)學(xué)和細(xì)胞學(xué)上的特征表現(xiàn)為: 氣孔,、花器,、花粉粒、種子,、果實(shí)甚至葉片等明顯變大,，單位面積葉片上的氣孔數(shù)目減少而密度降低等?？紤]到染色體觀察,、記數(shù)較為煩瑣，首先對(duì)試材從形態(tài)學(xué)和細(xì)胞學(xué)上來初步判斷是否為多倍體,，然后把初步斷定為多倍體的試材再觀察,、記錄染色體數(shù)目是否真正地發(fā)生了倍性的變異，從而zui終確定為多倍體,。
芽變選種是無性繁殖植物育種的一種有效途徑,，多以嵌合體的形式存在，特別是多倍體芽變,。通過檢測(cè)梢端分生組織LⅠ,、LⅡ 、LⅢ三層細(xì)胞的細(xì)胞,、細(xì)胞核及核仁的大小,，可以鑒定芽變材料倍性嵌合體的類型。
本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)多倍體鑒定的基本方法,。
一,、試材及用具
1．試材:玉米、小麥,、棉花,、草莓、番茄,、蘋果等。
2．用具:顯微鏡,、剪刀,、培養(yǎng)皿、載玻片,、蓋玻片,、吸水紙、鑷子,、紗布,、酒精燈、物鏡測(cè)微尺、目鏡測(cè)微尺等,。
3．試劑及配制
（1）卡諾氏固定液: 冰醋酸1份,，加純（或95%）酒精3份，混勻,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。
（2）醋酸纖維素液: 稱取10g醋酸纖維素，加入到100 mL的丙酮溶液中,，用玻棒攪拌數(shù)分鐘至醋酸纖維素全部溶解,。
（3）醋酸洋紅染色劑: 取45 mL冰醋酸，加入55 mL蒸餾水,，加熱至沸騰,，慢慢加入2 g洋紅，煮沸約5 min,，冷卻后加入2% 硫酸亞鐵,。過濾，貯于棕色瓶中,。
（4）解離液: 鉻酸2g,，濃硫酸8 mL，濃硝酸3 mL,，蒸餾水89 mL,，充分混勻。
二,、方法步驟
（一）間接方法
1．形態(tài)學(xué)觀察
觀察試材的形態(tài)學(xué)特征,，例如葉片、果實(shí),、種子,、花器等是否有較明顯的增大現(xiàn)象，如果肉眼就能觀察到明顯的增大現(xiàn)象,，說明試材很有可能是多倍體,。不論形態(tài)上是否存在明顯變異，還需觀察,、檢測(cè)細(xì)胞學(xué)上的變化,。
2．細(xì)胞學(xué)觀察
（1）檢測(cè)氣孔大小和密度
對(duì)葉背無茸毛的材料，可直接觀察,。取葉片用卡諾氏固定液固定,，撕取葉片下表皮置載玻片上，滴上1～2滴醋酸洋紅染色劑染色1～2 min,，蓋上蓋玻片,，用吸水紙吸去多余的染液，在顯微鏡下觀察記錄氣孔保衛(wèi)細(xì)胞長度、寬度和氣孔的密度,。
對(duì)葉背有茸毛的材料,，用印膜法觀察。 選取生長健壯葉片,，于葉背中部（避開葉脈）涂上一層均勻醋酸纖維素液,，約5 min后形成一層薄膜，用鑷子揭下薄膜,，就除掉了葉背的茸毛,。然后再往葉背涂一層醋酸纖維素液，注意要涂勻,，在室內(nèi)涼3～5 min,，用鑷子取下薄膜，置于載玻片上,，加蒸餾水或醋酸洋紅染色劑1～2滴,，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察氣孔的大小和密度,。
對(duì)葉背茸毛多的材料,，用解離液法觀察。先用醋酸纖維素液去掉茸毛,，然后把葉片剪成小塊放入解離液中浸泡,，直至表皮邊緣與葉肉脫離翹起，放入清水中漂洗,，揭下表皮,，置于載玻片上，用醋酸洋紅染色,，蓋上蓋玻片,，鏡檢。
把臨時(shí)制片在低倍鏡下找到氣孔,，換用高倍鏡,，用目鏡測(cè)微尺測(cè)量保衛(wèi)細(xì)胞大小，求30個(gè)氣孔大小的平均值,。然后統(tǒng)計(jì)計(jì)算每個(gè)視野中氣孔的數(shù)目,，移動(dòng)載玻片，換另外的視野,，進(jìn)行10次記數(shù),，用物鏡測(cè)微尺測(cè)量視野的直徑,，計(jì)算出每個(gè)視野的面積,，求出單位葉面積上的氣孔的數(shù)目，即為氣孔的密度。