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細(xì)胞生理活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)觀(guān)察
點(diǎn)擊次數(shù)：2889 發(fā)布時(shí)間：2017-2-6
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?nbsp;
通過(guò)制片與觀(guān)察加深理解細(xì)胞的運(yùn)動(dòng),、吞噬等生理活動(dòng)。
【實(shí)驗(yàn)用品】
一,、材料和標(biāo)本 雄性蟾蜍,、小白鼠、l％雞血懸液,、6％淀粉肉湯,、草履蟲(chóng)。
二,、器材和儀器 光鏡,、2ml注射器,、載玻片、蓋玻片,、解剖器材,、滴管、移液管,、試管,、玻璃片、黑紙,。
三,、試劑 0.3％臺(tái)盼蘭、1％剛果紅,。
【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】
一,、細(xì)胞的吞噬活動(dòng)
(一)原理
白細(xì)胞是機(jī)體防御系統(tǒng)中能游走的單位。它分為粒細(xì)胞系,、單核細(xì)胞系,、淋巴系三類(lèi)。它們有許多生理功能,，如游走性,、變形運(yùn)動(dòng)、趨化性,、吞噬異物等,。在白細(xì)胞中，以粒細(xì)胞,、單核細(xì)胞的吞噬活動(dòng)較強(qiáng),，故稱(chēng)此二類(lèi)細(xì)胞為吞噬細(xì)胞,。單核細(xì)胞由血液進(jìn)入組織后逐漸演變成巨噬細(xì)胞,。吞噬細(xì)胞主要靠吞噬來(lái)處理異物。吞噬細(xì)胞首先由于趨化作用而向異物游走,，然后伸出偽足包圍異物,，并發(fā)生內(nèi)吞作用形成吞噬泡將異物吞入細(xì)胞，繼而溶酶體與吞噬泡融合消化異物,。
(二)小白鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活動(dòng)的觀(guān)察
l．實(shí)驗(yàn)前二天,，每天向小鼠腹腔注射6％淀粉肉湯O．5～1ml(含O．3％臺(tái)盼蘭，起標(biāo)記作用),，以刺激腹腔產(chǎn)生較多的巨噬細(xì)胞(此步由教師在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行完畢),。
2．實(shí)驗(yàn)時(shí)，每組取一只經(jīng)上述處理的小鼠,，腹腔注射1％雞血懸液0．5～1ml,，注射后輕揉小鼠腹部以使紅細(xì)胞懸液分散均勻,。
3．1小時(shí)后，用頸椎脫位法處死小鼠,，迅速剖開(kāi)小鼠腹壁,，向腹腔注入O．5ml～1ml生理鹽水，用牙簽輕輕攪拌使生理鹽水與腹腔液混勻,。
4．用注射器抽取腹腔液,，滴片，然后蓋上蓋片,。
5．鏡檢,，高倍鏡下畫(huà)圖記錄所見(jiàn)結(jié)果。
二,、暗視野觀(guān)察細(xì)胞的纖毛和鞭毛運(yùn)動(dòng)
(一)原理
暗視野照明法是一種不使照射被檢物體的光線(xiàn)直接進(jìn)入物鏡的照明方法,。常常用它來(lái)觀(guān)察沒(méi)有染色的活體細(xì)胞或膠體粒子。利用此照明法,，在鏡檢時(shí)不能直接看到通過(guò)標(biāo)本的照明光線(xiàn),，只有被檢物體反射或衍射的光線(xiàn)進(jìn)入物鏡可以提高分辨率，在暗視野中可以看到明亮的被檢物體的存在和運(yùn)動(dòng),，但它們的內(nèi)部結(jié)構(gòu)卻看不清楚,。
(二)自制遮光板變普通顯微鏡為“簡(jiǎn)單的暗視野顯微鏡”。
步驟：
1．將顯微鏡聚光器調(diào)到zui高位,，用低倍鏡調(diào)焦至清楚,。
2．取下目鏡，從鏡筒中觀(guān)察并調(diào)節(jié)光圈的大小,，使其與鏡筒中所見(jiàn)物鏡的視野相等,。
3．放一塊透明玻璃于載物臺(tái)透光孔上，用尺子測(cè)量光圈孔徑,。
4．按照?qǐng)D6--1的形狀,，用黑紙剪成與調(diào)節(jié)后光圈孔徑一樣大小的中央遮光板。
5．將中央遮光板放置在顯微鏡的濾光框上,，即可進(jìn)行標(biāo)本的暗視野觀(guān)察,。
注：如果使用高倍鏡觀(guān)察標(biāo)本時(shí)，應(yīng)按高倍鏡調(diào)焦的視野大小重新制作中央遮光板,。
細(xì)胞生理活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)觀(guān)察
圖6—1中央遮光板
a．光圈孔徑
b．濾光片直徑
(三)觀(guān)察蟾蜍上頜粘膜上皮細(xì)胞的纖毛運(yùn)動(dòng)
步驟：
1．用搗毀腦脊髓的方法處死蟾蜍,。
2．腹部向上將蟾蜍固定在蠟盤(pán)上。
3．沿蟾蜍二側(cè)口角向后剪開(kāi)約l厘米,，將下頜翻轉(zhuǎn)固定在腹部,。
4．在上頜中線(xiàn)距喉頭1厘米處放置臘屑，觀(guān)察臘屑向什么方向移動(dòng),？記錄臘屑開(kāi)始移動(dòng)到消失的時(shí)間(見(jiàn)圖6--2蟾蜍口腔內(nèi)面圖),。
5．然后,，用眼科剪刀剪取咽頭前部的上頜粘膜約2×2cm2小塊，用牙簽挑取剪下的粘膜,，將縱切面貼于載片上,。
6．加一滴生理鹽水于載玻片標(biāo)本上，加蓋玻片,，鏡檢,。
細(xì)胞生理活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)觀(guān)察
圖6—2 蟾蜍口腔內(nèi)面圖
結(jié)果：
1．在低倍鏡下觀(guān)察上頜粘膜細(xì)胞纖毛運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象。
2．換高倍鏡仔細(xì)觀(guān)察纖毛有規(guī)律的運(yùn)動(dòng),。
(四)暗視野觀(guān)察蟾蜍精子的鞭毛運(yùn)動(dòng)