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染色體銀染色法
點擊次數(shù)：2063 發(fā)布時間：2016-11-3
一,、實驗目的
通過實驗,，掌握染色體銀染方法。
二,、實驗原理
銀染核仁成形區(qū)的方法,，zui早是Goodpasture 和Bloom(1975)提出的Ag-As技術。應用這種技術使人類,、哺乳動物,、兩棲類、植物等的核仁形成區(qū)(NOR)特異性染為黑色,。這種銀染色陽性的NOR稱為Ag-NOR,。
銀染方法的原理可能是由于轉錄的rDNA部分有豐富的酸性蛋白，它們具有S－H鍵和S－S鍵,，容易將Ag+還原為Ag的顆粒,，從而在活性的核仁形成區(qū)鍍上銀，呈現(xiàn)為黑色的區(qū)域,。本實驗將介紹染色體核仁形成區(qū)的銀染顯示法（Ag-NOR）,，并了解Ag-NOR的多態(tài)現(xiàn)象。
三,、實驗材料
兩棲類或小白鼠骨髓細胞染色體制片不經(jīng)染色留用的標本片,。
四、實驗器具和藥品試劑
顯微鏡,、冰箱,、恒溫水浴鍋、溫度計,、大培養(yǎng)皿,、燒杯、吸管,、滴瓶,、切片架、切片盒,、鑷子,。
硝酸銀、明膠,、甲酸,、擦鏡紙,。
五、實驗方法和步驟
(一) 把大培養(yǎng)皿放入水浴中,，升溫至65～70℃,，同時用燒杯預熱蒸餾水。
(二) 將標本片平放在預熱的培養(yǎng)皿墊枕上,，用50％硝酸銀溶液與2％明膠溶液以2：1混勻后,，立刻滴加到染色體制片上，復以蓋片（或擦鏡紙）,。
(三) 待反應液由無色透明變黃,，zui后變成棕褐色后（約2～4分鐘），立即取出載片,，用預熱的蒸餾水*沖洗,，晾干后鏡檢。染色適度的片子,，染色體為金黃色,，NORS為黑色。
注意事項：
(一) 用于Ag-NOR染色的染色體標本,，是新鮮制備的,，以一周以內的制片為好，同時片內要求有眾多的分裂相,。
(二) 銀染用的兩種反應液新配,，一時用不完可裝棕色瓶中，冰箱４℃保存,，但不得超過10天,。
(三) 配制和使用硝酸銀溶液時要格外小心，不要滴灑在地上,、桌上及手上等處,，氧化為黑色的污點極難除去,。
(四) 在明膠中添加甲酸可促進反應過程（2克明膠＋99毫升蒸餾水＋1毫升甲酸）,。