疏水作用色譜是在高離子強(qiáng)度的條件下,，蛋白質(zhì)溶解度降低，易吸附在中等疏水性的填料表面,。隨著離子強(qiáng)度的降低,，蛋白質(zhì)的溶解度增加，逐步從柱子上洗脫下來,。該法具有高分辨率及保持蛋白質(zhì)生物活性的特點(diǎn),。

 

疏水作用色譜的固定相表面為弱疏水性基團(tuán)，它的疏水性比反相色譜用的固定相低幾十到幾百倍,，而流動相為高離子濃度的鹽溶液,。蛋白質(zhì)分子在這樣的固定相和流動相中進(jìn)行分配，蛋白質(zhì)分子上的疏水性基團(tuán)和固定相的疏水基團(tuán)作用而被保留,。當(dāng)用流動相洗脫時(shí)逐漸降低流動相的離子強(qiáng)度,，洗脫能力增強(qiáng),。利用被分離組分分子表面的疏水微區(qū)、（可逆）變性后暴露出的疏水殘基,，或在高鹽環(huán)境下暴露于分子表面的疏水殘基與固定相的疏水性 配體之間的作用強(qiáng)弱,，依次用從高至低離子強(qiáng)度洗脫液可將疏水作用由弱到強(qiáng)的組分分離開。蛋白質(zhì)分子按其疏水性大小被依次洗脫出來,，疏水性小的先流出,。在這樣的高鹽水溶液中，蛋白質(zhì)不會失活,。高濃度鹽與水分子發(fā)生強(qiáng)烈作用,，導(dǎo)致疏水分子周圍形成空穴的水分子減少，促進(jìn)疏水性分子與介質(zhì)的疏水配基之間發(fā)生結(jié)合,。這種疏水作用的大小取決于固定相和溶質(zhì)的極性,、流動相的組成和濃度。由于各種蛋白質(zhì)表面氨基酸殘基極性不同,，因此有可能通過改變固定相的極性和流動相的組成使蛋白質(zhì)得到分離,。

 

疏水層析的原理*不同于離子交換層析或凝膠過濾層析等技術(shù)，使該技術(shù)與后兩者經(jīng)常聯(lián)合使用來分離復(fù)雜的生物樣品,。目前該技術(shù)主要應(yīng)用領(lǐng)域是在蛋白質(zhì)的純化方面,，成為血清蛋白、膜結(jié)合蛋白,、核蛋白、受體,、重組蛋白等,，以及一些藥物分子，甚至細(xì)胞等分離時(shí)的有效手段