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三目熒光顯微鏡標(biāo)本制作特點(diǎn)和觀察要求
閱讀：1053 發(fā)布時(shí)間：2016-6-28
1.三目熒光顯微鏡基本操作步驟
（1）安裝紫外防護(hù)罩,。
（2）打開高壓汞燈的電源控制箱開關(guān),。
（3）插入擋光板,，中斷光路,。
（4）預(yù)熱5—10分鐘,。
（5）將載有樣品的載玻片放到載物臺(tái)上,。
（6）選擇接物鏡（按照先低倍，后高倍順序）。
（7）旋轉(zhuǎn)分光鏡組件轉(zhuǎn)盤,，選擇所需要的分光鏡組件：“O”為觀察透射光時(shí)用;“WU”為觀察藍(lán)色熒光時(shí)用（如DAPl）;“WB”為觀察綠色熒光時(shí)用（如FITC）;“WG"為觀察紅色熒光時(shí)用（如TRITC）,。
（8）使用阻斷濾片（目前多數(shù)阻斷濾片內(nèi)置于熒光顯微鏡）。
（9）通過粗,、細(xì)螺旋調(diào)整焦距,。
（10）打開與顯微鏡連接的計(jì)算機(jī)，點(diǎn)擊數(shù)碼成像系統(tǒng)軟件,，采集數(shù)碼圖像,。
2.三目熒光顯微鏡注意事項(xiàng)
（1）因觀察熒光使用的光源為高壓汞燈，其中發(fā)出的光含紫外光,，對(duì)人眼有損害作用,，故必須安裝紫外防護(hù)罩。
（2）為延長(zhǎng)汞燈壽命,，打開汞燈后不可立即關(guān)閉，以免水銀蒸發(fā)不*而損壞電極,，一般需要等15分鐘后才能關(guān)閉,。
（3）汞燈熄滅后待*冷卻才能重新啟動(dòng)，否則燈內(nèi)汞蒸氣尚未恢復(fù)到液態(tài),，內(nèi)阻極小,，再次施加電壓，會(huì)引起短路,，導(dǎo)致汞燈爆炸,。這樣不僅損壞電器，更重要的是汞蒸氣溢出,，將導(dǎo)致工作室污染,。故關(guān)閉汞燈之后，不能馬上再次打開,，必須等待至少30分鐘,。
（4）高壓汞燈工作時(shí)會(huì)散發(fā)大量的熱量，因此,，工作環(huán)境溫度不宜太高,，必須有良好的散熱條件。
（5）汞燈的使用壽命約200—300小時(shí),，在電源控制箱上有時(shí)間累計(jì)計(jì)數(shù)器,，使用者要記錄累計(jì)小時(shí)數(shù)，達(dá)到300小時(shí),，需更換新燈泡,，否則亮度不夠，影響觀察。
3.三目熒光顯微鏡標(biāo)本制作特點(diǎn)和觀察要求
（1）載玻片：載玻片厚度應(yīng)在0.8—1.2mm之間,，玻片太厚吸收光多,，激發(fā)光難以在標(biāo)本上聚集。載玻片必須光潔,，厚度均勻,，無明顯自發(fā)熒光。有時(shí)需用石英玻璃載玻片,。
（2）蓋玻片：蓋玻片厚度應(yīng)約0.17mm,，光潔。為加強(qiáng)激發(fā)光,，也可用干涉蓋玻片,，這種特制蓋玻片的表面鍍有若干層對(duì)不同波長(zhǎng)的光起不同干涉作用的物質(zhì)（如氟化鎂），它可以使熒光順利通過而反射激發(fā)光,，這種反射的激發(fā)光可激發(fā)標(biāo)本中的熒光,。
（3）標(biāo)本：組織切片或其他標(biāo)本不能太厚，一般以5——20pm為宜,，切片太厚可使激發(fā)光大部分消耗在標(biāo)本下部,，而物鏡直接觀察的標(biāo)本上部不能被激發(fā)。切片折疊或雜質(zhì)過多均可影響熒光的觀察,。
（4）封片劑：封片劑必須無自發(fā)熒光,、五色透明。加上抗淬滅劑后再用指甲油（實(shí)際操作中體會(huì)指甲油封片效果很好,，可做到薄而均勻）將蓋玻片四周封固,，既保持蓋玻片不滑動(dòng)，又能防止抗淬滅劑蒸發(fā),。在沒有抗淬滅劑的情況下,，也可使用含30%甘油的PBS，還可用甘油與0.5mol/L碳酸鹽緩沖液（pH 9.0——9.5）等量混合液作封片劑,。
（5）鏡頭的清潔：在油鏡使用完畢后,，需用擦鏡紙沾上無水乙醇或3：7的醇醚混合液輕輕擦拭。
（6）及時(shí)觀察：標(biāo)本染色后應(yīng)及時(shí)觀察,，因時(shí)間過長(zhǎng)熒光會(huì)逐漸減弱,。若標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時(shí)間,。