相稱顯微鏡是做什么的?
閱讀:586 發(fā)布時間:2019-6-19
相稱顯微鏡是一種增加對比度的方法,??梢栽诓蝗旧那闆r下看到活體細胞。
相稱顯微鏡,,又叫相差顯微鏡(Phase contrast microscopy ),。相差是一種增加對比度的方法,可以在不染色的情況下看到活體細胞,。
相稱顯微鏡是一種利用光的衍射和干涉現(xiàn)象將透過標本的光線光程差或相位差轉(zhuǎn)換成肉眼可分辨的振幅差顯微鏡,。提高了密度不同物質(zhì)圖像的明暗區(qū)別,可用于觀察未經(jīng)染色的細胞結(jié)構(gòu),。
位相差顯微鏡的原理為何,?如何調(diào)整?
相差成像
人的眼睛能夠識別明與暗之差(光的強度)和顏色不同(光的波長不同),,但難以識別差別小的無色的透明物體,。
光對無色透明物體(相位物體)并不引起明、暗和顏色的變化,,而只產(chǎn)生所謂的相位差,。可是這種相位差不能用肉眼識別,,也就看不見這種相位物體了,。
相差顯微鏡利用阿貝成像原理,,把相位資訊轉(zhuǎn)化為振幅資訊,是觀察透明物體的關(guān)鍵,。
光路原理
相差光路重要兩個元件是環(huán)形光闌和相位板
環(huán)形光闌:不同的環(huán)狀孔形成的光闌,,它們的直徑和孔寬是與不同的物鏡相匹配的。由于透明圓環(huán)所成的像恰好落在物鏡后焦點平面和相板上的共軛面重合,。因此,,未發(fā)生偏斜的直射光便通過共軛面。其作用是將直射光所形成的像從一些衍射旁像中分出來,。
相位板:安裝在物鏡的后焦面處,,相板裝有吸收光線的吸收膜和推遲相位的相位膜。它除能推遲直射光線或衍射光的相位以外,,還有吸收光使亮度發(fā)生變化的作用,。
利用位相差聚光鏡及內(nèi)部位相環(huán)所構(gòu)成的環(huán)狀光圈,產(chǎn)生中空光錐通過聚光鏡,、穿過檢體,,經(jīng)過物鏡內(nèi)的光延遲位環(huán)板而成,因檢體折射指數(shù)不同,,造成繞射光束與直射光束發(fā)生干涉作用,,得到明暗對比的效果。調(diào)整位相差裝置,,先選擇聚光鏡上與物鏡相同倍率之位相差環(huán),,所形成的亮環(huán)與物鏡內(nèi)的暗環(huán)配合,調(diào)整聚光鏡上亮環(huán),,使之重疊即可,。
位相稱顯微鏡應用
主要提供胚胎形態(tài)的觀察、胚胎級數(shù)的判別等特殊功用,。解剖顯微鏡,,提供睪丸取精之后,切取組織搜尋精子或采卵時搜尋卵子,,因此臨床應用于:
●觀察卵子及胚胎的發(fā)育情形,。
●輔助胚胎植入前診斷之細胞核固定。
●精蟲顯微注射之應用操作,。
●胚胎輔助孵化之應用操作,。
相稱顯微鏡的優(yōu)勢:
我們一般用普通顯微鏡觀察試樣的顯微鏡組織,是靠試樣表面反射光的強弱(即黑白灰度的不同)來鑒別它,。
有的顯微鏡組織由于其反射率和吸收率的不同而產(chǎn)生不同的灰度,。反射率較大者,則組織較明亮:反射率較小者,,組織比較灰暗,。
當試樣上兩相的反射系數(shù)相同,,僅有因輕微侵蝕或各相硬度不同而使拋光時形成微小凹凸,或者有塑料性變形及第二類共格差別,。
對此一般生物顯微鏡明場就不易鑒別,,當表面高低起伏極小時,更難辨別,,而相稱技術(shù)成功地解決了這一問題,。一般表面高低差在100~1500Ao(1Ao=0.1NM)范圍內(nèi)均能用相稱顯微鏡來觀察。