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華洋科儀

激子耦合圓二色測(cè)試應(yīng)用

時(shí)間:2022-4-2 閱讀:1263
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激子耦合圓二色測(cè)試應(yīng)用

一、概述


激子耦合圓二色發(fā)生于大分子兩個(gè)手性生色團(tuán)之間,。當(dāng)兩個(gè)生色團(tuán)位置合適(距離短,、角度合適、環(huán)境合適等),,它們互相電子轉(zhuǎn)移產(chǎn)生兩個(gè)不同的CD帶,,如圖1所示。激子耦合圓二色靈敏度和識(shí)別度高,,它與給定的空間結(jié)構(gòu)相關(guān),,可以獲得復(fù)雜結(jié)構(gòu)的絕對(duì)構(gòu)型信息。激子耦合圓二色經(jīng)常用在高分子,、手性有機(jī)凝膠或其他手性大分子的可見光區(qū),,也可用于蛋白的近紫外區(qū),是傳統(tǒng)遠(yuǎn)紫外圓二色譜的補(bǔ)充,。

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圖1:激子耦合能級(jí)說明


二,、實(shí)驗(yàn)條件


2-氨基嘌呤是經(jīng)典的熒光標(biāo)記物,它與胸腺嘧啶或胞嘧啶配對(duì),。當(dāng)兩個(gè)2-氨基嘌呤相距較近,,它們手性中心相互作用,大分子會(huì)扭曲并改變構(gòu)象,,這會(huì)產(chǎn)生激子耦合圓二色,。本應(yīng)用說明了在DNA和蛋白相互作用中,由2-氨基嘌呤導(dǎo)致的激子耦合圓二色,。測(cè)試儀器為MOS-500圓二色光譜儀,,波長(zhǎng)范圍為300-360 nm,狹縫為2 nm,,采樣速度為每點(diǎn)0.5 s,。樣品濃度為10 uM,石英比色池光程為1 cm,,室溫,,沒有氮?dú)獯祾摺,?瞻撞捎猛瑮l件測(cè)試并自動(dòng)扣減,。

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22-氨基嘌呤


三、結(jié)果


含有2-氨基嘌呤的DNA-蛋白復(fù)合物的圓二色譜如圖3所示,。由于DNA自身的圓二色吸收信號(hào)一直到310 nm,,所以DNA-蛋白復(fù)合物的圓二色譜中只看得到正的克頓效應(yīng)。最大信號(hào)在330 nm處為1.2 mdeg,可以看出MOS-500圓二色光譜儀靈敏度很高,。通過對(duì)比可以看到,,沒有加入DNA的圓二色光譜中沒有對(duì)應(yīng)的與圓二色吸收,通過圓二色光譜可以很明顯區(qū)分有無激子耦合發(fā)生,,如圖4所示,。



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3:圓二色譜:DNA+蛋白




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4:有和沒有DNA情況下的圓二色譜

四、結(jié)論


用標(biāo)準(zhǔn)配置的MOS-500圓二色光譜儀就可以很容易的測(cè)到激子耦合圓二色譜,。通常激子耦合圓二色測(cè)試波長(zhǎng)大于195nm,,而MOS-500圓二色光譜儀在185nm以上不需要氮?dú)獯祾撸梢詷O大的節(jié)省您儀器的運(yùn)行成本,。







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