乳酸脫氫酶ELISA試劑盒,，小鼠LDH試劑盒說明書

產(chǎn)品名稱：小鼠乳酸脫氫酶（LDH）ELISA試劑盒

規(guī)格：48T/96T

產(chǎn)品特點：慧穎生物提供的小鼠乳酸脫氫酶（LDH）ELISA試劑盒，采用純進(jìn)口試劑和進(jìn)口工藝流程,，高靈敏度,、重復(fù)性好、質(zhì)量穩(wěn)定,、特異性強,，深的客戶重復(fù)訂購使用。

乳酸脫氫酶ELISA試劑盒,，小鼠LDH試劑盒說明書

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預(yù)先包被乳酸脫氫酶（LDH）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的乳酸脫氫酶（LDH）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。

樣品收集,、處理及保存方法

 刺激，收集血液后,，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項

1. 試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20 分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存,。

3. 濃度為0 的S0 號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5 倍,，zui終結(jié)果乘以5 才是樣本實際濃度,。

4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作,。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱96孔配置48孔配置備注

微孔酶標(biāo)板12 孔×8 條12 孔×4 條無

標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無

樣本稀釋液6mL 3mL 無

檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無

20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進(jìn)行稀釋

底物A 6mL 3mL 無

底物B 6mL 3mL 無

終止液6mL 3mL 無

封板膜2 張2 張無

說明書1 份1 份無

自封袋1 個1 個無

注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0,、0.5,、1、2,、4,、8 IU/L

試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20 稀釋，即1 份的20×洗滌緩沖液加19 份的蒸餾水,。

洗板方法

1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置1min 后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干,，如此洗板5 次。

2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min,，洗板5 次。

操作步驟

1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；

3. 樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5. 棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機洗板）,。

6. 每孔加入底物A、B 各50μL,，37℃避光孵育15min,。

7. 每孔加入終止液50μL，15min 內(nèi),，在450nm 波長處測定各孔的OD 值,。

結(jié)果判斷

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel 工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),，對應(yīng)OD 值作縱坐標(biāo),，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值,。

試劑盒性能

1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值,，大于等于0.9900。

2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于0.1 IU/L,。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%,。

5. 貯藏：2-8℃,，避光防潮保存。

6. 有效期：6 個月

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