大鼠BNP elisa 試劑盒Kit 

                                    說(shuō)明書(shū)

一,、檢測(cè)原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被腦鈉素/腦鈉尿肽（BNP）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的腦鈉素/腦鈉尿肽（BNP）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度,。

二,、樣品收集、處理及保存方法：

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后,，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。

5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

三,、操作注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用,。

2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存。

3. 濃度為0 的S0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白,；按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5 倍,，zui終結(jié)果乘以5 才是樣本實(shí)際濃度。

4. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間,、加液量及順序進(jìn)行溫育操作,。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

四,、試劑盒組成：

微孔酶標(biāo)+標(biāo)準(zhǔn)品+樣本稀釋液+檢測(cè)抗體-HRP+20×洗滌緩沖+底物A+底物B+終止液+封板膜+說(shuō)明書(shū)

五,、檢測(cè)范圍：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為0、50,、100,、200、400,、800 pg/mL

六,、洗板方法：

1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，靜置1min 后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干，如此洗板5 次,。

2. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min，洗板5 次,。

七,、操作步驟：

1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；

3. 樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL,；空白孔不加,。

4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機(jī)洗板）,。

6. 每孔加入底物A,、B 各50μL，37℃避光孵育15min,。

7. 每孔加入終止液50μL,，15min 內(nèi)，在450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD 值,。

八,、結(jié)果判斷：

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel 工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),，對(duì)應(yīng)OD 值作縱坐標(biāo),，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值,。

九,、試劑盒性能：

1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值，大于等于0.9900,。

2. 靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于1.0 pg/mL,。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%,。

5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存,。